ຂໍ​ຂອບ​ໃຈ​ທ່ານ​ສໍາ​ລັບ​ການ​ຢ້ຽມ​ຢາມ Nature.com​.ເວີຊັນຂອງຕົວທ່ອງເວັບທີ່ທ່ານກໍາລັງໃຊ້ມີການສະຫນັບສະຫນູນ CSS ຈໍາກັດ.ເພື່ອປະສົບການທີ່ດີທີ່ສຸດ, ພວກເຮົາແນະນຳໃຫ້ທ່ານໃຊ້ບຣາວເຊີທີ່ອັບເດດແລ້ວ (ຫຼືປິດການນຳໃຊ້ໂໝດຄວາມເຂົ້າກັນໄດ້ໃນ Internet Explorer).ໃນເວລານີ້, ເພື່ອຮັບປະກັນການສະຫນັບສະຫນູນຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງ, ພວກເຮົາຈະສະແດງເວັບໄຊທ໌ໂດຍບໍ່ມີຮູບແບບແລະ JavaScript.
gene vectors ສໍາລັບການປິ່ນປົວຂອງ pulmonary fibrosis cystic pulmonary ຕ້ອງໄດ້ຮັບການເປົ້າຫມາຍຂອງທໍ່ຫາຍໃຈ conductive, ເນື່ອງຈາກວ່າ peripheral transduction ປອດບໍ່ມີຜົນການປິ່ນປົວ.ປະສິດທິພາບຂອງການຖ່າຍທອດໄວຣັສແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງໂດຍກົງກັບເວລາທີ່ຢູ່ອາໄສຂອງຜູ້ໃຫ້ບໍລິ.ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ນ້ໍາການຈັດສົ່ງເຊັ່ນ: ເຊື້ອສາຍພັນທຸກໍາຈະແຜ່ລາມເຂົ້າໄປໃນ alveoli ໃນລະຫວ່າງການຫາຍໃຈ, ແລະອະນຸພາກການປິ່ນປົວຂອງຮູບຮ່າງໃດກໍ່ຖືກໂຍກຍ້າຍອອກຢ່າງໄວວາໂດຍການຂົນສົ່ງ mucociliary.ການຂະຫຍາຍເວລາທີ່ຢູ່ອາໄສຂອງເຊື້ອສາຍພັນໃນລະບົບຫາຍໃຈແມ່ນມີຄວາມສໍາຄັນແຕ່ຍາກທີ່ຈະບັນລຸໄດ້.ອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກທີ່ເຊື່ອມຕໍ່ກັນກັບຜູ້ຂົນສົ່ງທີ່ສາມາດມຸ້ງໄປຫາຫນ້າດິນຂອງເສັ້ນທາງຫາຍໃຈສາມາດປັບປຸງການກໍາຫນົດເປົ້າຫມາຍໃນພາກພື້ນ.ເນື່ອງຈາກບັນຫາກ່ຽວກັບການຖ່າຍຮູບ vivo, ພຶດຕິກໍາຂອງອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກຂະຫນາດນ້ອຍດັ່ງກ່າວຢູ່ໃນຫນ້າທາງເດີນຫາຍໃຈໃນທີ່ປະທັບຂອງສະຫນາມແມ່ເຫຼັກນໍາໃຊ້ແມ່ນເຂົ້າໃຈບໍ່ດີ.ຈຸດປະສົງຂອງການສຶກສານີ້ແມ່ນເພື່ອນໍາໃຊ້ການຖ່າຍຮູບ synchrotron ເພື່ອເບິ່ງເຫັນພາບໃນ vivo ການເຄື່ອນໄຫວຂອງອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກໃນ trachea ຂອງຫນູ anesthetized ເພື່ອສຶກສານະໂຍບາຍດ້ານແລະຮູບແບບຂອງພຶດຕິກໍາຂອງອະນຸພາກດຽວແລະຫຼາຍໃນ vivo.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ພວກເຮົາຍັງໄດ້ປະເມີນວ່າການຈັດສົ່ງອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກ lentiviral ໃນທີ່ປະທັບຂອງສະຫນາມແມ່ເຫຼັກຈະຊ່ວຍເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງ transduction ໃນ trachea ຫນູ.ການຖ່າຍຮູບ Synchrotron X-ray ສະແດງໃຫ້ເຫັນພຶດຕິກໍາຂອງອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກໃນສະຫນາມແມ່ເຫຼັກ stationary ແລະການເຄື່ອນຍ້າຍໃນ vitro ແລະ in vivo.ອະນຸພາກບໍ່ສາມາດຖືກລາກໄດ້ງ່າຍທົ່ວຫນ້າດິນຂອງຊ່ອງທາງການມີຊີວິດໂດຍໃຊ້ແມ່ເຫຼັກ, ແຕ່ໃນລະຫວ່າງການຂົນສົ່ງ, ເງິນຝາກໄດ້ຖືກສຸມໃສ່ໃນພາກສະຫນາມຂອງມຸມເບິ່ງ, ບ່ອນທີ່ພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກທີ່ເຂັ້ມແຂງທີ່ສຸດ.ປະສິດທິພາບການຖ່າຍທອດຍັງເພີ່ມຂຶ້ນອີກ 6 ເທົ່າເມື່ອອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກ lentiviral ຖືກສົ່ງມາໃນທີ່ປະທັບຂອງສະຫນາມແມ່ເຫຼັກ.ຮ່ວມກັນ, ຜົນໄດ້ຮັບເຫຼົ່ານີ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກ lentiviral ແລະພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກອາດຈະເປັນວິທີການທີ່ມີຄຸນຄ່າເພື່ອປັບປຸງການກໍາຫນົດເປົ້າຫມາຍຂອງ gene vector ແລະລະດັບ transduction ໃນທໍ່ອາກາດ conductive ໃນ vivo.
Cystic fibrosis (CF) ແມ່ນເກີດມາຈາກການປ່ຽນແປງໃນ gene ດຽວທີ່ເອີ້ນວ່າ CF transmembrane conductance regulator (CFTR).ທາດໂປຼຕີນຈາກ CFTR ແມ່ນຊ່ອງທາງ ion ທີ່ມີຢູ່ໃນຫຼາຍໆຈຸລັງ epithelial ໃນທົ່ວຮ່າງກາຍ, ລວມທັງເສັ້ນທາງຫາຍໃຈ, ສະຖານທີ່ສໍາຄັນໃນຂະບວນການສ້າງໂຣກ fibrosis cystic.ຂໍ້ບົກພ່ອງຂອງ CFTR ນໍາໄປສູ່ການຂົນສົ່ງນ້ໍາຜິດປົກກະຕິ, ການຂາດນ້ໍາຂອງຫນ້າດິນຂອງທາງເດີນຫາຍໃຈ, ແລະຄວາມເລິກຂອງຊັ້ນນ້ໍາຂອງເສັ້ນທາງຫາຍໃຈຫຼຸດລົງ (ASL).ມັນຍັງເຮັດໃຫ້ຄວາມບົກຜ່ອງຂອງລະບົບການຂົນສົ່ງ mucociliary (MCT) ເພື່ອອະນາໄມເສັ້ນທາງຫາຍໃຈຂອງອະນຸພາກທີ່ຫາຍໃຈເຂົ້າແລະເຊື້ອພະຍາດ.ເປົ້າຫມາຍຂອງພວກເຮົາແມ່ນການພັດທະນາການປິ່ນປົວດ້ວຍ gene lentiviral (LV) ເພື່ອສົ່ງສໍາເນົາທີ່ຖືກຕ້ອງຂອງ CFTR gene ແລະປັບປຸງສຸຂະພາບຂອງ ASL, MCT, ແລະປອດ, ແລະສືບຕໍ່ພັດທະນາເຕັກໂນໂລຢີໃຫມ່ທີ່ສາມາດວັດແທກຕົວກໍານົດການເຫຼົ່ານີ້ຢູ່ໃນ vivo1.
LV vectors ແມ່ນຫນຶ່ງໃນຜູ້ສະຫມັກຊັ້ນນໍາສໍາລັບການປິ່ນປົວ gene cystic fibrosis, ສ່ວນໃຫຍ່ແມ່ນຍ້ອນວ່າພວກເຂົາສາມາດປະສົມປະສານ gene ການປິ່ນປົວເຂົ້າໄປໃນຈຸລັງພື້ນຖານຂອງທາງເດີນຫາຍໃຈ (ຈຸລັງລໍາຕົ້ນຂອງທາງເດີນຫາຍໃຈ).ນີ້ແມ່ນສິ່ງສໍາຄັນເພາະວ່າພວກເຂົາສາມາດຟື້ນຟູຄວາມຊຸ່ມຊື່ນປົກກະຕິແລະການລ້າງຂີ້ກະເທີ່ໂດຍການຈໍາແນກເຂົ້າໄປໃນຈຸລັງທາງເດີນຫາຍໃຈທີ່ຖືກແກ້ໄຂດ້ວຍ gene ທີ່ເປັນປະໂຫຍດທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ cystic fibrosis, ເຊິ່ງກໍ່ໃຫ້ເກີດຜົນປະໂຫຍດຕະຫຼອດຊີວິດ.vectors LV ຕ້ອງໄດ້ຮັບການມຸ້ງຕໍ່ກັບເສັ້ນທາງເດີນອາກາດ, ເພາະວ່ານີ້ແມ່ນບ່ອນທີ່ການມີສ່ວນຮ່ວມຂອງປອດໃນ CF ເລີ່ມຕົ້ນ.ການສົ່ງ vector ເລິກເຂົ້າໄປໃນປອດອາດຈະສົ່ງຜົນໃຫ້ alveolar transduction, ແຕ່ນີ້ບໍ່ມີຜົນການປິ່ນປົວໃນ cystic fibrosis.ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ນ້ໍາເຊັ່ນ: ເຊື້ອສາຍພັນທຸກໍາໂດຍທໍາມະຊາດເຄື່ອນຍ້າຍເຂົ້າໄປໃນ alveoli ໃນເວລາທີ່ inhalation ຫຼັງຈາກການເກີດລູກ 3,4 ແລະອະນຸພາກການປິ່ນປົວໄດ້ຖືກຂັບໄລ່ອອກຢ່າງໄວວາເຂົ້າໄປໃນຊ່ອງປາກໂດຍ MCTs.ປະສິດທິພາບຂອງການຖ່າຍທອດ LV ແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງໂດຍກົງກັບໄລຍະເວລາທີ່ vector ຢູ່ໃກ້ກັບຈຸລັງເປົ້າຫມາຍເພື່ອອະນຸຍາດໃຫ້ການດູດຊຶມຂອງເຊນ - "ເວລາທີ່ຢູ່ອາໄສ" 5 ທີ່ສັ້ນລົງໄດ້ງ່າຍໂດຍການໄຫຼຂອງອາກາດໃນພາກພື້ນເຊັ່ນດຽວກັນກັບການປະສານງານຂອງ mucus ແລະ particles MCT.ສໍາລັບໂຣກ fibrosis cystic, ຄວາມສາມາດໃນການຍືດເວລາທີ່ຢູ່ອາໄສຂອງ LV ໃນເສັ້ນທາງຫາຍໃຈແມ່ນສໍາຄັນເພື່ອບັນລຸລະດັບການສົ່ງຕໍ່ໃນລະດັບສູງໃນພື້ນທີ່ນີ້, ແຕ່ມາຮອດປັດຈຸບັນແມ່ນມີຄວາມທ້າທາຍ.
ເພື່ອເອົາຊະນະອຸປະສັກນີ້, ພວກເຮົາສະເຫນີວ່າອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກ LV (MPs) ສາມາດຊ່ວຍໃນສອງວິທີເສີມ.ຫນ້າທໍາອິດ, ພວກເຂົາເຈົ້າສາມາດໄດ້ຮັບການນໍາພາໂດຍແມ່ເຫຼັກກັບຫນ້າດິນຂອງທາງເດີນຫາຍໃຈເພື່ອປັບປຸງການກໍານົດເປົ້າຫມາຍແລະຊ່ວຍໃຫ້ອະນຸພາກຂອງ gene carrier ຢູ່ໃນພື້ນທີ່ທີ່ເຫມາະສົມຂອງເສັ້ນທາງຫາຍໃຈ;ແລະ ASL) ຍ້າຍເຂົ້າໄປໃນຊັ້ນຂອງເຊນ 6. MPs ຖືກນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງເປັນຍານພາຫະນະການສົ່ງຢາເສບຕິດເປົ້າຫມາຍໃນເວລາທີ່ພວກເຂົາຜູກມັດກັບພູມຕ້ານທານ, ຢາເຄມີບໍາບັດ, ຫຼືໂມເລກຸນຂະຫນາດນ້ອຍອື່ນໆທີ່ຕິດກັບເຍື່ອເຊນຫຼືຜູກມັດກັບ receptors ດ້ານຂອງເຊນຂອງເຂົາເຈົ້າແລະສະສົມຢູ່ສະຖານທີ່ tumor ໃນ. ການປະກົດຕົວຂອງໄຟຟ້າສະຖິດ.ພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກສໍາລັບການປິ່ນປົວມະເຮັງ 7. ວິທີການອື່ນໆ "hyperthermic" ແມ່ນແນໃສ່ຂ້າຈຸລັງເນື້ອງອກໂດຍການໃຫ້ຄວາມຮ້ອນ MPs ເມື່ອສໍາຜັດກັບ oscillating ພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກ.ຫຼັກການຂອງການຖ່າຍທອດແມ່ເຫຼັກ, ໃນທີ່ສະຫນາມແມ່ເຫຼັກຖືກນໍາໃຊ້ເປັນຕົວແທນການຖ່າຍທອດເພື່ອເສີມຂະຫຍາຍການຖ່າຍທອດ DNA ເຂົ້າໄປໃນຈຸລັງ, ຖືກນໍາໃຊ້ທົ່ວໄປໃນ vitro ໂດຍໃຊ້ vectors gene non-viral ແລະ viral ສໍາລັບເສັ້ນຈຸລັງທີ່ຍາກທີ່ຈະຖ່າຍທອດ. ..ປະສິດທິພາບຂອງ LV magnetotransfection ກັບການສົ່ງຂອງ LV MP in vitro ເຂົ້າໄປໃນເສັ້ນຈຸລັງຂອງ epithelium bronchial ຂອງມະນຸດໃນທີ່ປະທັບຂອງສະຫນາມແມ່ເຫຼັກສະຖິດໄດ້ຖືກສ້າງຕັ້ງຂຶ້ນ, ການເພີ່ມປະສິດທິພາບຂອງ transduction 186 ເທົ່າເມື່ອທຽບກັບ LV vector ດຽວ.LV MT ຍັງໄດ້ຖືກ ນຳ ໃຊ້ກັບຕົວແບບໃນ vitro ຂອງໂຣກ fibrosis cystic, ບ່ອນທີ່ການຖ່າຍທອດແມ່ເຫຼັກໄດ້ເພີ່ມການຖ່າຍທອດ LV ໃນວັດທະນະ ທຳ ການໂຕ້ຕອບຂອງແຫຼວທາງອາກາດໂດຍປັດໃຈ 20 ໃນທີ່ປະທັບຂອງ cystic fibrosis sputum10.ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ໃນ vivo magnetotransfection ອະໄວຍະວະໄດ້ຮັບຄວາມສົນໃຈຂ້ອນຂ້າງຫນ້ອຍແລະພຽງແຕ່ໄດ້ຮັບການປະເມີນໃນສັດຈໍານວນຫນ້ອຍຫນຶ່ງການສຶກສາ11,12,13,14,15, ໂດຍສະເພາະໃນປອດ16,17.ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງການຖ່າຍທອດແມ່ເຫຼັກໃນການປິ່ນປົວປອດໃນ cystic fibrosis ແມ່ນຈະແຈ້ງ.Tan et al.(2020) ໄດ້ກ່າວວ່າ "ການສຶກສາການຢັ້ງຢືນກ່ຽວກັບການຈັດສົ່ງ pulmonary ປະສິດທິພາບຂອງ nanoparticles ແມ່ເຫຼັກຈະເປີດທາງສໍາລັບຍຸດທະສາດການຫາຍໃຈ CFTR ໃນອະນາຄົດເພື່ອປັບປຸງຜົນໄດ້ຮັບທາງດ້ານການຊ່ວຍໃນຄົນເຈັບທີ່ມີ fibrosis cystic"6.
ພຶດຕິກໍາຂອງອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກຂະຫນາດນ້ອຍຢູ່ດ້ານຂອງລະບົບຫາຍໃຈໃນທີ່ປະທັບຂອງສະຫນາມແມ່ເຫຼັກນໍາໃຊ້ແມ່ນມີຄວາມຫຍຸ້ງຍາກທີ່ຈະເຫັນພາບແລະການສຶກສາ, ແລະດັ່ງນັ້ນເຂົາເຈົ້າໄດ້ຖືກເຂົ້າໃຈບໍ່ດີ.ໃນການສຶກສາອື່ນໆ, ພວກເຮົາໄດ້ພັດທະນາວິທີການ Synchrotron Propagation Based Phase Contrast X-Ray Imaging (PB-PCXI) ສໍາລັບການຖ່າຍຮູບທີ່ບໍ່ຮຸກຮານແລະປະລິມານການປ່ຽນແປງນາທີໃນ vivo ໃນຄວາມເລິກ ASL18 ແລະພຶດຕິກໍາ MCT19, 20 ເພື່ອວັດແທກນ້ໍາຊ່ອງອາຍແກັສໂດຍກົງ. ແລະຖືກນໍາໃຊ້ເປັນຕົວຊີ້ວັດປະສິດທິພາບການປິ່ນປົວເບື້ອງຕົ້ນ.ນອກຈາກນັ້ນ, ວິທີການໃຫ້ຄະແນນ MCT ຂອງພວກເຮົາໃຊ້ particles ເສັ້ນຜ່າກາງ 10–35 µm ປະກອບດ້ວຍ alumina ຫຼືແກ້ວດັດຊະນີ refractive ສູງເປັນເຄື່ອງຫມາຍ MCT ສັງເກດເຫັນດ້ວຍ PB-PCXI21.ວິທີການທັງສອງແມ່ນເຫມາະສົມສໍາລັບການຖ່າຍຮູບລະດັບຂອງປະເພດອະນຸພາກ, ລວມທັງ MPs.
ເນື່ອງຈາກຄວາມລະອຽດທາງກວ້າງຂອງພື້ນທີ່ແລະທາງໂລກສູງ, ການວິເຄາະ ASL ແລະ MCT ຂອງພວກເຮົາທີ່ອີງໃສ່ PB-PCXI ແມ່ນເຫມາະສົມດີໃນການສຶກສານະໂຍບາຍດ້ານແລະຮູບແບບພຶດຕິກໍາຂອງອະນຸພາກດຽວແລະຫຼາຍໃນ vivo ເພື່ອຊ່ວຍໃຫ້ພວກເຮົາເຂົ້າໃຈແລະເພີ່ມປະສິດທິພາບວິທີການຈັດສົ່ງ gene MP.ວິທີການທີ່ພວກເຮົາໃຊ້ຢູ່ທີ່ນີ້ແມ່ນອີງໃສ່ການສຶກສາຂອງພວກເຮົາໂດຍໃຊ້ SPring-8 BL20B2 beamline, ເຊິ່ງພວກເຮົາສັງເກດເຫັນການເຄື່ອນໄຫວຂອງນ້ໍາຫຼັງຈາກການສົ່ງປະລິມານຂອງ vector dummy ເຂົ້າໄປໃນທາງດັງແລະທໍ່ຫາຍໃຈຂອງຫນູເພື່ອຊ່ວຍອະທິບາຍຮູບແບບການສະແດງອອກຂອງ gene heterogeneous ຂອງພວກເຮົາສັງເກດເຫັນ. ໃນ gene ຂອງພວກເຮົາ.ການ​ສຶກ​ສາ​ສັດ​ທີ່​ມີ​ຂະ​ຫນາດ​ຂົນ​ສົ່ງ​ຂອງ 3.4​.
ຈຸດປະສົງຂອງການສຶກສານີ້ແມ່ນເພື່ອນໍາໃຊ້ synchrotron PB-PCXI ເພື່ອສະແດງພາບໃນການເຄື່ອນໄຫວ vivo ຂອງ MPs ຊຸດໃນ trachea ຂອງຫນູທີ່ມີຊີວິດຢູ່.ການສຶກສາການຖ່າຍຮູບ PB-PCXI ເຫຼົ່ານີ້ຖືກອອກແບບມາເພື່ອທົດສອບຊຸດ MP, ຄວາມແຂງແຮງຂອງສະຫນາມແມ່ເຫຼັກ, ແລະສະຖານທີ່ເພື່ອກໍານົດຜົນກະທົບຂອງການເຄື່ອນໄຫວຂອງ MP.ພວກເຮົາສົມມຸດວ່າສະຫນາມແມ່ເຫຼັກພາຍນອກຈະຊ່ວຍໃຫ້ MF ທີ່ສົ່ງຢູ່ຫຼືຍ້າຍໄປຫາພື້ນທີ່ເປົ້າຫມາຍ.ການສຶກສາເຫຼົ່ານີ້ຍັງອະນຸຍາດໃຫ້ພວກເຮົາກໍານົດການຕັ້ງຄ່າແມ່ເຫຼັກທີ່ເພີ່ມປະລິມານຂອງອະນຸພາກທີ່ເຫລືອຢູ່ໃນ trachea ຫຼັງຈາກ deposition.ໃນຊຸດທີສອງຂອງການສຶກສາ, ພວກເຮົາມີຈຸດປະສົງເພື່ອນໍາໃຊ້ການຕັ້ງຄ່າທີ່ດີທີ່ສຸດນີ້ເພື່ອສະແດງໃຫ້ເຫັນເຖິງຮູບແບບການຖ່າຍທອດທີ່ເກີດຈາກການສົ່ງ LV-MPs ໄປສູ່ vivo ກັບ rat airways, ໂດຍສົມມຸດວ່າການຈັດສົ່ງ LV-MPs ໃນສະພາບການກໍານົດເປົ້າຫມາຍຂອງເສັ້ນທາງຫາຍໃຈຈະສົ່ງຜົນ. ໃນການເພີ່ມປະສິດທິພາບການຖ່າຍທອດ LV..
ການສຶກສາກ່ຽວກັບສັດທັງໝົດໄດ້ດໍາເນີນໄປຕາມພິທີການທີ່ໄດ້ຮັບການອະນຸມັດຈາກມະຫາວິທະຍາໄລ Adelaide (M-2019-060 ແລະ M-2020-022) ແລະຄະນະກໍາມະການດ້ານຈັນຍາບັນສັດ SPring-8 Synchrotron.ການທົດລອງໄດ້ດໍາເນີນໄປຕາມຄໍາແນະນໍາຂອງ ARRIVE.
ຮູບພາບ x-ray ທັງຫມົດໄດ້ຖືກຖ່າຍຢູ່ທີ່ BL20XU beamline ຢູ່ SPring-8 synchrotron ໃນປະເທດຍີ່ປຸ່ນໂດຍໃຊ້ການຕັ້ງຄ່າທີ່ຄ້າຍຄືກັນກັບທີ່ອະທິບາຍກ່ອນຫນ້ານີ້ 21,22.ໂດຍຫຍໍ້, ກ່ອງທົດລອງຕັ້ງຢູ່ 245 ແມັດຈາກວົງການເກັບຮັກສາ synchrotron.ໄລຍະຫ່າງຂອງເຄື່ອງກວດຕົວຢ່າງເຖິງ 0.6 m ແມ່ນໃຊ້ສໍາລັບການສຶກສາການຖ່າຍຮູບອະນຸພາກ ແລະ 0.3 m ສໍາລັບການສຶກສາການຖ່າຍຮູບ vivo ເພື່ອສ້າງຜົນກະທົບທາງກົງກັນຂ້າມໄລຍະ.beam monochromatic ທີ່ມີພະລັງງານຂອງ 25 keV ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້.ຮູບ​ພາບ​ເຫຼົ່າ​ນີ້​ໄດ້​ຮັບ​ການ​ນໍາ​ໃຊ້​ຄວາມ​ລະ​ອຽດ​ສູງ transducer X-ray (SPring-8 BM3​) ບວກ​ໃສ່​ກັບ​ເຄື່ອງ​ກວດ​ສອບ sCMOS​.transducer ປ່ຽນແສງ X-rays ເປັນແສງທີ່ເບິ່ງເຫັນໄດ້ໂດຍໃຊ້ scintillator ຫນາ 10 µm (Gd3Al2Ga3O12), ເຊິ່ງຫຼັງຈາກນັ້ນນໍາໄປຫາເຊັນເຊີ sCMOS ໂດຍໃຊ້ຈຸດປະສົງກ້ອງຈຸລະທັດ ×10 (NA 0.3).ເຄື່ອງກວດຈັບ sCMOS ເປັນ Orca-Flash4.0 (Hamamatsu Photonics, ຍີ່ປຸ່ນ) ທີ່ມີຂະຫນາດ array ຂອງ 2048 × 2048 pixels ແລະຂະຫນາດ pixels ລວງຂອງ 6.5 × 6.5 µm.ການຕັ້ງຄ່ານີ້ໃຫ້ຂະຫນາດ pixel isotropic ປະສິດທິພາບຂອງ 0.51 µm ແລະພາກສະຫນາມຂອງມຸມເບິ່ງປະມານ 1.1 mm × 1.1 mm.ໄລຍະເວລາການເປີດຮັບແສງຂອງ 100 ms ໄດ້ຖືກເລືອກເພື່ອຂະຫຍາຍອັດຕາສ່ວນສັນຍານຕໍ່ສຽງລົບກວນສູງສຸດຂອງອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກພາຍໃນ ແລະ ພາຍນອກທໍ່ຫາຍໃຈ ໃນຂະນະທີ່ຫຼຸດຜ່ອນສິ່ງປະດິດທີ່ເກີດຈາກການຫາຍໃຈ.ສໍາລັບໃນການສຶກສາ vivo, ມີການວາງ shutter X-ray ໄວຢູ່ໃນເສັ້ນທາງ X-ray ເພື່ອຈໍາກັດປະລິມານລັງສີໂດຍການສະກັດ beam X-ray ລະຫວ່າງ exposure.
ສື່ LV ບໍ່ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ໃນການສຶກສາການຖ່າຍຮູບ SPring-8 PB-PCXI ໃດໆເພາະວ່າຫ້ອງຮູບພາບ BL20XU ບໍ່ແມ່ນ Biosafety Level 2 ທີ່ໄດ້ຮັບການຮັບຮອງ.ແທນທີ່ຈະ, ພວກເຮົາໄດ້ເລືອກ MPs ທີ່ມີຄຸນລັກສະນະດີຈາກສອງຜູ້ຂາຍການຄ້າທີ່ກວມເອົາຂະຫນາດ, ວັດສະດຸ, ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງທາດເຫຼັກ, ແລະການນໍາໃຊ້, - ທໍາອິດເພື່ອເຂົ້າໃຈວິທີການພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກຜົນກະທົບຕໍ່ການເຄື່ອນໄຫວຂອງ MPs ໃນ capillaries ແກ້ວ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນໃນ. ເສັ້ນທາງເດີນອາກາດ.ດ້ານ.ຂະຫນາດຂອງ MP ແຕກຕ່າງກັນຈາກ 0.25 ຫາ 18 µm ແລະຜະລິດຈາກວັດສະດຸຕ່າງໆ (ເບິ່ງຕາຕະລາງ 1), ແຕ່ອົງປະກອບຂອງແຕ່ລະຕົວຢ່າງ, ລວມທັງຂະຫນາດຂອງອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກໃນ MP, ແມ່ນບໍ່ຮູ້ຈັກ.ອີງຕາມການສຶກສາ MCT ຂອງພວກເຮົາຢ່າງກວ້າງຂວາງ 19, 20, 21, 23, 24, ພວກເຮົາຄາດວ່າ MPs ລົງເຖິງ 5 µm ສາມາດເຫັນໄດ້ໃນພື້ນຜິວ tracheal airway, ສໍາລັບການຍົກຕົວຢ່າງ, ໂດຍການຫັກກອບຕິດຕໍ່ກັນເພື່ອເບິ່ງການປັບປຸງການເບິ່ງເຫັນຂອງການເຄື່ອນໄຫວ MP.MP ດຽວຂອງ 0.25 µm ແມ່ນຂະຫນາດນ້ອຍກວ່າຄວາມລະອຽດຂອງອຸປະກອນການຖ່າຍຮູບ, ແຕ່ PB-PCXI ຄາດວ່າຈະກວດພົບຄວາມຄົມຊັດຂອງປະລິມານແລະການເຄື່ອນໄຫວຂອງແຫຼວດ້ານເທິງທີ່ພວກມັນຖືກຝາກໄວ້ຫຼັງຈາກຖືກຝາກໄວ້.
ຕົວຢ່າງສໍາລັບແຕ່ລະ MP ໃນຕາຕະລາງ.1 ໄດ້ຖືກກະກຽມໃນ 20 μlແກ້ວ capillaries (Drummond Microcaps, PA, USA) ທີ່ມີເສັ້ນຜ່າກາງພາຍໃນ 0.63 ມມ.ອະນຸພາກ corpuscular ແມ່ນມີຢູ່ໃນນ້ໍາ, ໃນຂະນະທີ່ອະນຸພາກ CombiMag ແມ່ນມີຢູ່ໃນຂອງແຫຼວທີ່ເປັນເຈົ້າຂອງຜູ້ຜະລິດ.ແຕ່ລະທໍ່ແມ່ນເຕັມໄປດ້ວຍຂອງແຫຼວເຄິ່ງຫນຶ່ງ (ປະມານ 11 µl) ແລະວາງໃສ່ຕົວເກັບຕົວຢ່າງ (ເບິ່ງຮູບ 1).ຝາອັດປາກມົດລູກແກ້ວໄດ້ຖືກວາງໄວ້ຕາມແນວນອນຢູ່ເທິງເວທີຢູ່ໃນຫ້ອງສະແດງພາບ, ຕາມລໍາດັບ, ແລະວາງຢູ່ແຄມຂອງແຫຼວ.A ເສັ້ນຜ່າສູນກາງ 19 ມມ (ຍາວ 28 ມມ) ການສະກົດຈິດ nickel-shell ທີ່ເຮັດຈາກໂລກທີ່ຫາຍາກ, neodymium, ທາດເຫຼັກແລະ boron (NdFeB) (N35, cat. no. LM1652, Jaycar Electronics, ອົດສະຕາລີ) ທີ່ມີ remanence ຂອງ 1.17 T ໄດ້ຕິດກັບ a ຕາຕະລາງການໂອນແຍກຕ່າງຫາກເພື່ອບັນລຸໄລຍະໄກປ່ຽນຕໍາແຫນ່ງຂອງທ່ານໃນລະຫວ່າງການສະແດງຜົນ.ການຖ່າຍພາບ X-ray ເລີ່ມຕົ້ນເມື່ອແມ່ເຫຼັກຕັ້ງຢູ່ເທິງຕົວຢ່າງປະມານ 30 ມມ ແລະໄດ້ມາດ້ວຍຄວາມໄວ 4 ເຟຣມຕໍ່ວິນາທີ.ໃນລະຫວ່າງການຖ່າຍຮູບ, ແມ່ເຫຼັກໄດ້ຖືກນໍາມາໃກ້ກັບທໍ່ capillary ແກ້ວ (ຢູ່ໃນໄລຍະປະມານ 1 ມມ) ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນຍ້າຍໄປຕາມທໍ່ເພື່ອປະເມີນຜົນກະທົບຂອງຄວາມເຂັ້ມແຂງພາກສະຫນາມແລະຕໍາແຫນ່ງ.
ການຕັ້ງຄ່າການຖ່າຍພາບໃນ vitro ທີ່ບັນຈຸຕົວຢ່າງ MP ໃນເສັ້ນປະສາດແກ້ວຢູ່ໃນຂັ້ນຕອນຂອງການແປຂອງຕົວຢ່າງ xy.ເສັ້ນທາງຂອງ beam X-ray ແມ່ນຫມາຍດ້ວຍເສັ້ນຈຸດສີແດງ.
ເມື່ອການເບິ່ງເຫັນ in vitro ຂອງ MPs ໄດ້ຖືກສ້າງຕັ້ງຂຶ້ນ, ຊຸດຍ່ອຍຂອງພວກມັນໄດ້ຖືກທົດສອບຢູ່ໃນ vivo ໃນຫນູຊະນິດ Wistar albino ເພດຍິງ (ອາຍຸ ~ 12 ອາທິດ, ~ 200 g).Medetomidine 0.24 mg/kg (Domitor®, Zenoaq, Japan), midazolam 3.2 mg/kg (Dormicum®, Astellas Pharma, Japan) ແລະ butorphanol 4 mg/kg (Vetorphale®, Meiji Seika).ໜູຖືກຢາສລົບດ້ວຍຢາ Pharma (ຍີ່ປຸ່ນ) ດ້ວຍການສີດເຂົ້າທາງປາກຊ່ອງຄອດ.ຫຼັງຈາກຢາສະລົບ, ພວກເຂົາເຈົ້າໄດ້ຖືກກະກຽມສໍາລັບການຖ່າຍຮູບໂດຍການເອົາຂົນອ້ອມຮອບ trachea, ໃສ່ທໍ່ endotracheal (ET; 16 Ga intravenous cannula, Terumo BCT), ແລະ immobilizing ໃຫ້ເຂົາເຈົ້າຢູ່ໃນທ່າ supine ໃນແຜ່ນຮູບພາບທີ່ເຮັດເອງທີ່ມີຖົງຄວາມຮ້ອນ. ເພື່ອຮັກສາອຸນຫະພູມຮ່າງກາຍ.22. ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ແຜ່ນຮູບພາບໄດ້ຖືກຕິດກັບຂັ້ນຕອນຕົວຢ່າງໃນກ່ອງຮູບພາບໃນມຸມເລັກນ້ອຍເພື່ອຈັດວາງ trachea ຕາມແນວນອນໃນຮູບ x-ray ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຮູບ 2a.
(a) ໃນການຕັ້ງຄ່າການຖ່າຍຮູບ vivo ໃນຫນ່ວຍງານການຖ່າຍຮູບ SPring-8, ເສັ້ນທາງ X-ray beam ທີ່ໝາຍດ້ວຍເສັ້ນຈຸດສີແດງ.(b,c) Tracheal magnet localization ໄດ້ດໍາເນີນການຫ່າງໄກສອກຫຼີກໂດຍໃຊ້ສອງກ້ອງຖ່າຍຮູບ IP ທີ່ຕິດຢູ່ທາງຂວາງ.ຢູ່ເບື້ອງຊ້າຍຂອງຮູບພາບໃນຫນ້າຈໍ, ທ່ານສາມາດເບິ່ງ loop ສາຍຖືຫົວແລະ cannula ການຈັດສົ່ງທີ່ຕິດຕັ້ງຢູ່ໃນທໍ່ ET.
ລະບົບປັ໊ມເຂັມສັກຢາຄວບຄຸມໄລຍະໄກ (UMP2, World Precision Instruments, Sarasota, FL) ໂດຍໃຊ້ເຂັມສັກຢາແກ້ວ 100 µl ຖືກເຊື່ອມຕໍ່ກັບທໍ່ PE10 (0.61 mm OD, 0.28 mm ID) ໂດຍໃຊ້ເຂັມ 30 Ga.ຫມາຍທໍ່ເພື່ອຮັບປະກັນວ່າປາຍຢູ່ໃນຕໍາແຫນ່ງທີ່ຖືກຕ້ອງໃນ trachea ເມື່ອໃສ່ທໍ່ endotracheal.ການນໍາໃຊ້ micropump, plunger syringe ໄດ້ຖືກໂຍກຍ້າຍອອກແລະປາຍຂອງທໍ່ໄດ້ຖືກ immersed ໃນຕົວຢ່າງ MP ທີ່ຈະສົ່ງ.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ທໍ່ສົ່ງທີ່ໂຫຼດໄດ້ຖືກໃສ່ເຂົ້າໄປໃນທໍ່ endotracheal, ວາງປາຍຢູ່ສ່ວນທີ່ເຂັ້ມແຂງທີ່ສຸດຂອງສະຫນາມແມ່ເຫຼັກທີ່ຄາດໄວ້ຂອງພວກເຮົາ.ການໄດ້ມາຮູບພາບໄດ້ຖືກຄວບຄຸມໂດຍໃຊ້ເຄື່ອງກວດລົມຫາຍໃຈທີ່ເຊື່ອມຕໍ່ກັບກ່ອງກໍານົດເວລາທີ່ອີງໃສ່ Arduino ຂອງພວກເຮົາ, ແລະສັນຍານທັງໝົດ (ເຊັ່ນ: ອຸນຫະພູມ, ການຫາຍໃຈ, ການເປີດ/ປິດ ແລະຮັບຮູບພາບ) ຖືກບັນທຶກໂດຍໃຊ້ Powerlab ແລະ LabChart (AD Instruments, Sydney, Australia) 22 ໃນເວລາທີ່ການຖ່າຍຮູບໃນເວລາທີ່ທີ່ຢູ່ອາໄສບໍ່ສາມາດໃຊ້ໄດ້, ສອງກ້ອງຖ່າຍຮູບ IP (Panasonic BB-SC382) ໄດ້ຖືກຈັດຕໍາແຫນ່ງຢູ່ທີ່ປະມານ 90 °ຕໍ່ກັນແລະກັນແລະນໍາໃຊ້ເພື່ອຄວບຄຸມຕໍາແຫນ່ງຂອງແມ່ເຫຼັກທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ trachea ໃນລະຫວ່າງການຖ່າຍຮູບ (ຮູບ 2b, c).ເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນສິ່ງປະດິດການເຄື່ອນໄຫວ, 1 ຮູບຕໍ່ລົມຫາຍໃຈແມ່ນໄດ້ມາໃນລະຫວ່າງທີ່ພູພຽງທໍ່ຫາຍໃຈຢູ່ປາຍຍອດ.
ແມ່ເຫຼັກແມ່ນຕິດກັບຂັ້ນຕອນທີສອງ, ເຊິ່ງອາດຈະຕັ້ງຢູ່ຫ່າງໄກສອກຫຼີກຢູ່ດ້ານນອກຂອງຮ່າງກາຍຂອງຮູບພາບ.ຕໍາແຫນ່ງແລະການຕັ້ງຄ່າຕ່າງໆຂອງແມ່ເຫຼັກໄດ້ຖືກທົດສອບ, ລວມທັງ: ວາງຢູ່ທີ່ມຸມປະມານ 30 °ຂ້າງເທິງ trachea (ການຕັ້ງຄ່າແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບ 2a ແລະ 3a);ແມ່ເຫຼັກອັນໜຶ່ງຢູ່ເໜືອສັດ ແລະອີກອັນໜຶ່ງຢູ່ດ້ານລຸ່ມ, ດ້ວຍເສົາທີ່ຕັ້ງໄວ້ເພື່ອດຶງດູດ (ຮູບ 3b)., ຫນຶ່ງແມ່ເຫຼັກຂ້າງເທິງສັດແລະຫນຶ່ງຂ້າງລຸ່ມນີ້, ມີ poles ກໍານົດສໍາລັບການ repulsion (ຮູບ 3c), ແລະຫນຶ່ງແມ່ເຫຼັກຂ້າງເທິງແລະ perpendicular ກັບ trachea ໄດ້ (ຮູບ 3d).ຫຼັງຈາກການຕັ້ງຄ່າສັດແລະແມ່ເຫຼັກແລະໂຫຼດ MP ພາຍໃຕ້ການທົດສອບເຂົ້າໄປໃນປັ໊ມ syringe, ໃຫ້ປະລິມານ 50 µl ໃນອັດຕາ 4 µl / ວິນາທີເມື່ອໄດ້ຮັບຮູບພາບ.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ແມ່ເຫຼັກໄດ້ຖືກຍ້າຍກັບຄືນໄປບ່ອນໄປມາຕາມຫຼືໃນທົ່ວ trachea ໃນຂະນະທີ່ສືບຕໍ່ໄດ້ຮັບຮູບພາບ.
ການຕັ້ງຄ່າແມ່ເຫຼັກສໍາລັບການຖ່າຍຮູບ vivo (a) ຫນຶ່ງແມ່ເຫຼັກຂ້າງເທິງ trachea ໃນມຸມປະມານ 30 °, (b) ສອງແມ່ເຫຼັກກໍາຫນົດຄ່າສໍາລັບການດຶງດູດ, (c) ສອງແມ່ເຫຼັກກໍານົດສໍາລັບການ repulsion, (d) ຫນຶ່ງແມ່ເຫຼັກຂ້າງເທິງແລະຕັ້ງສາກກັບ. ຫຼອດລົມ.ຜູ້ສັງເກດການໄດ້ເບິ່ງລົງຈາກປາກໄປຫາປອດຜ່ານທໍ່ຫຼອດລົມ ແລະ ແສງ X-ray ຜ່ານທາງຊ້າຍຂອງໜູ ແລະ ອອກທາງເບື້ອງຂວາ.ແມ່ເຫຼັກໄດ້ຖືກເຄື່ອນຍ້າຍຕາມຄວາມຍາວຂອງທໍ່ຫາຍໃຈຫຼືຊ້າຍແລະຂວາຂ້າງເທິງ trachea ໃນທິດທາງຂອງ beam X-ray.
ພວກເຮົາຍັງໄດ້ຊອກຫາເພື່ອກໍານົດການເບິ່ງເຫັນແລະພຶດຕິກໍາຂອງອະນຸພາກໃນເສັ້ນທາງຫາຍໃຈໃນເວລາທີ່ບໍ່ມີການປະສົມຂອງການຫາຍໃຈແລະອັດຕາການເຕັ້ນຫົວໃຈ.ດັ່ງນັ້ນ, ໃນຕອນທ້າຍຂອງໄລຍະເວລາການຖ່າຍພາບ, ສັດໄດ້ຖືກ euthanized ຂອງມະນຸດຍ້ອນການໃຊ້ຢາເກີນ pentobarbital (Somnopentyl, Pitman-Moore, Washington Crossing, USA; ~ 65 mg/kg ip).ສັດບາງໂຕຖືກປະໄວ້ເທິງເວທີການຖ່າຍຮູບ, ແລະຫຼັງຈາກຢຸດການຫາຍໃຈແລະການເຕັ້ນຂອງຫົວໃຈ, ຂະບວນການຖ່າຍຮູບໄດ້ຖືກເຮັດຊ້ໍາອີກ, ເພີ່ມປະລິມານ MP ເພີ່ມເຕີມຖ້າບໍ່ມີ MP ສັງເກດເຫັນຢູ່ໃນຫນ້າທາງຫາຍໃຈ.
ຮູບພາບທີ່ເປັນຜົນໄດ້ຖືກແກ້ໄຂສໍາລັບພື້ນທີ່ຮາບພຽງແລະບ່ອນມືດແລະຫຼັງຈາກນັ້ນປະກອບເຂົ້າໄປໃນຮູບເງົາ (20 ເຟຣມຕໍ່ວິນາທີ; 15–25 × ຄວາມໄວປົກກະຕິໂດຍອີງຕາມອັດຕາການຫາຍໃຈ) ໂດຍໃຊ້ຕົວອັກສອນທີ່ກໍານົດເອງທີ່ຂຽນໃນ MATLAB (R2020a, The Mathworks).
ການສຶກສາທັງຫມົດກ່ຽວກັບການຈັດສົ່ງ vector gene LV ໄດ້ຖືກດໍາເນີນຢູ່ໃນສູນຄົ້ນຄວ້າສັດຂອງວິທະຍາໄລ Adelaide Laboratory ແລະມີຈຸດປະສົງເພື່ອນໍາໃຊ້ຜົນຂອງການທົດລອງ SPring-8 ເພື່ອປະເມີນວ່າການຈັດສົ່ງ LV-MP ໃນທີ່ປະທັບຂອງສະຫນາມແມ່ເຫຼັກສາມາດເສີມຂະຫຍາຍການໂອນ gene ໃນ vivo. .ເພື່ອປະເມີນຜົນກະທົບຂອງ MF ແລະສະຫນາມແມ່ເຫຼັກ, ສອງກຸ່ມຂອງສັດໄດ້ຖືກປະຕິບັດ: ກຸ່ມຫນຶ່ງໄດ້ຖືກສັກດ້ວຍ LV MF ດ້ວຍການວາງແມ່ເຫຼັກ, ແລະກຸ່ມອື່ນໆໄດ້ຖືກສັກດ້ວຍກຸ່ມຄວບຄຸມດ້ວຍ LV MF ໂດຍບໍ່ມີແມ່ເຫຼັກ.
LV gene vectors ໄດ້ຖືກສ້າງຂື້ນໂດຍໃຊ້ວິທີການທີ່ອະທິບາຍກ່ອນຫນ້ານີ້ 25, 26 .vector LacZ ສະແດງອອກເຖິງ gene beta-galactosidase localized nuclear ຂັບເຄື່ອນໂດຍ MPSV constitutive promoter (LV-LacZ), ເຊິ່ງຜະລິດຜະລິດຕະພັນປະຕິກິລິຢາສີຟ້າໃນຈຸລັງ transduced, ສັງເກດເຫັນຢູ່ດ້ານຫນ້າແລະພາກສ່ວນຂອງເນື້ອເຍື່ອປອດ.ການໄຕເຣັດໄດ້ຖືກປະຕິບັດໃນວັດທະນະທໍາເຊນໂດຍການນັບຈໍານວນຈຸລັງ LacZ-positive ດ້ວຍຕົນເອງໂດຍໃຊ້ hemocytometer ເພື່ອຄິດໄລ່ titer ໃນ TU/ml.ບັນທຸກແມ່ນເກັບຮັກສາໄວ້ cryopreserved ຢູ່ທີ່ -80 ° C, thawed ກ່ອນທີ່ຈະນໍາໃຊ້, ແລະຜູກມັດກັບ CombiMag ໂດຍການປະສົມ 1: 1 ແລະ incubating ສຸດກ້ອນຢ່າງຫນ້ອຍ 30 ນາທີກ່ອນການຈັດສົ່ງ.
ໜູ Sprague Dawley ປົກກະຕິ (n = 3/group, ~2-3 anesthetized ip ທີ່ມີສ່ວນປະສົມຂອງ 0.4mg/kg medetomidine (Domitor, Ilium, Australia) ແລະ 60mg/kg ketamine (Ilium, Australia) ໃນອາຍຸ 1 ເດືອນ) ip ) ການສີດແລະບໍ່ຜ່າຕັດຊ່ອງປາກທີ່ມີ 16 Ga intravenous cannula.ເພື່ອຮັບປະກັນວ່າເນື້ອເຍື່ອທາງເດີນຫາຍໃຈ tracheal ໄດ້ຮັບການຖ່າຍທອດ LV, ມັນໄດ້ຖືກປັບສະພາບໂດຍໃຊ້ໂປໂຕຄອນ perturbation ກົນຈັກຂອງພວກເຮົາທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ກ່ອນຫນ້ານີ້ເຊິ່ງຫນ້າດິນຂອງທໍ່ຫາຍໃຈຖືກ rubbed axially ດ້ວຍກະຕ່າສາຍ (N-Circle, ເຄື່ອງສະກັດຫີນ nitinol ໂດຍບໍ່ມີປາຍ NTSE-022115) -UDH , Cook Medical, USA) 30 p28.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ປະມານ 10 ນາທີຫຼັງຈາກການລົບກວນໃນຕູ້ຄວາມປອດໄພທາງຊີວະພາບ, ການບໍລິຫານ tracheal ຂອງ LV-MP ໄດ້ຖືກປະຕິບັດ.
ສະຫນາມແມ່ເຫຼັກທີ່ໃຊ້ໃນການທົດລອງນີ້ໄດ້ຖືກຕັ້ງຄ່າຄ້າຍຄືກັນກັບການສຶກສາ x-ray ໃນ vivo, ໂດຍມີແມ່ເຫຼັກດຽວກັນທີ່ຖືຢູ່ທົ່ວ trachea ດ້ວຍຕົວຍຶດ stent ການກັ່ນ (ຮູບ 4).ປະລິມານ 50 µl (2 x 25 µl aliquots) ຂອງ LV-MP ຖືກສົ່ງໄປຫາ trachea (n = 3 ສັດ) ໂດຍໃຊ້ pipette gel-tipped ຕາມທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ກ່ອນຫນ້ານີ້.ກຸ່ມຄວບຄຸມ (n = 3 ສັດ) ໄດ້ຮັບ LV-MP ດຽວກັນໂດຍບໍ່ມີການນໍາໃຊ້ແມ່ເຫຼັກ.ຫຼັງຈາກສໍາເລັດການ້ໍາຕົ້ມ, cannula ໄດ້ຖືກໂຍກຍ້າຍອອກຈາກທໍ່ endotracheal ແລະສັດໄດ້ຖືກ extubated.ແມ່ເຫຼັກຍັງຄົງຢູ່ໃນສະຖານທີ່ສໍາລັບ 10 ນາທີກ່ອນທີ່ຈະເອົາອອກ.ໜູຖືກສັກຢາໃສ່ໃຕ້ຜິວໜັງດ້ວຍຢາ meloxicam (1 ml/kg) (Ilium, Australia) ຕາມດ້ວຍການຖອນຢາສະລົບດ້ວຍການສີດເຂົ້າທາງຊ່ອງຄອດ 1 mg/kg atipamazole hydrochloride (Antisedan, Zoetis, Australia).ຫນູໄດ້ຖືກເກັບຮັກສາໄວ້ຢ່າງອົບອຸ່ນແລະສັງເກດເຫັນຈົນກ່ວາການຟື້ນຕົວຢ່າງສົມບູນຈາກອາການສລົບ.
ອຸປະກອນຈັດສົ່ງ LV-MP ໃນຕູ້ຄວາມປອດໄພທາງຊີວະພາບ.ທ່ານສາມາດເຫັນໄດ້ວ່າແຂນເສື້ອ Luer-lock ສີຂີ້ເຖົ່າອ່ອນໆຂອງທໍ່ ET ອອກມາຈາກປາກ, ແລະປາຍທໍ່ gel ທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຮູບໄດ້ຖືກໃສ່ຜ່ານທໍ່ ET ໄປສູ່ຄວາມເລິກທີ່ຕ້ອງການເຂົ້າໄປໃນ trachea.
ຫນຶ່ງອາທິດຫຼັງຈາກຂັ້ນຕອນການບໍລິຫານ LV-MP, ສັດໄດ້ຖືກເສຍສະລະຂອງມະນຸດໂດຍການຫາຍໃຈເອົາ 100% CO2 ແລະການສະແດງອອກ LacZ ໄດ້ຖືກປະເມີນໂດຍໃຊ້ການປິ່ນປົວ X-gal ມາດຕະຖານຂອງພວກເຮົາ.ສາມວົງກະດູກ cartilage caudal ທີ່ສຸດໄດ້ຖືກໂຍກຍ້າຍອອກເພື່ອຮັບປະກັນວ່າຄວາມເສຍຫາຍທາງກົນຈັກຫຼືການເກັບຮັກສານ້ໍາເນື່ອງຈາກການຈັດວາງທໍ່ endotracheal ຈະບໍ່ຖືກລວມເຂົ້າໃນການວິເຄາະ.ແຕ່ລະ trachea ໄດ້ຖືກຕັດອອກຕາມລວງຍາວເພື່ອໃຫ້ໄດ້ສອງເຄິ່ງສໍາລັບການວິເຄາະແລະວາງໄວ້ໃນຈອກທີ່ມີຢາງຊິລິໂຄນ (Sylgard, Dow Inc) ໂດຍໃຊ້ເຂັມ Minutien (ເຄື່ອງມືວິທະຍາສາດທີ່ດີ) ເພື່ອເບິ່ງພາບຂອງພື້ນຜິວ luminal.ການແຜ່ກະຈາຍ ແລະລັກສະນະຂອງເຊລທີ່ຖືກຖ່າຍທອດໄດ້ຖືກຢືນຢັນໂດຍການຖ່າຍຮູບດ້ານໜ້າໂດຍໃຊ້ກ້ອງຈຸລະທັດ Nikon (SMZ1500) ດ້ວຍກ້ອງ DigiLite ແລະຊອບແວ TCapture (Tucsen Photonics, ຈີນ).ຮູບພາບໄດ້ມາຢູ່ທີ່ການຂະຫຍາຍ 20x (ລວມທັງການຕັ້ງຄ່າສູງສຸດສໍາລັບຄວາມກວ້າງເຕັມຂອງ trachea), ມີຄວາມຍາວທັງຫມົດຂອງ trachea ສະແດງໃຫ້ເຫັນເທື່ອລະກ້າວ, ສະຫນອງການຊ້ອນກັນພຽງພໍລະຫວ່າງແຕ່ລະຮູບພາບເພື່ອໃຫ້ຮູບພາບສາມາດ "stitched".ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ຮູບພາບຈາກແຕ່ລະ trachea ໄດ້ຖືກລວມເຂົ້າກັນເປັນຮູບປະກອບດຽວໂດຍໃຊ້ Composite Image Editor ຮຸ່ນ 2.0.3 (Microsoft Research) ໂດຍໃຊ້ວິທີການເຄື່ອນໄຫວແບບແຜນ. ພື້ນທີ່ຂອງການສະແດງອອກຂອງ LacZ ພາຍໃນຮູບພາບປະກອບຂອງ tracheal ຈາກສັດແຕ່ລະໂຕໄດ້ຖືກຄິດໄລ່ໂດຍໃຊ້ສະຄິບ MATLAB ອັດຕະໂນມັດ (R2020a, MathWorks) ດັ່ງທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ກ່ອນໜ້ານີ້ 28, ໂດຍໃຊ້ການຕັ້ງຄ່າ 0.35 < Hue < 0.58, Saturation > 0.15, ແລະ Value < 0.7. ພື້ນທີ່ຂອງການສະແດງອອກ LacZ ພາຍໃນຮູບພາບປະກອບຂອງ tracheal ຈາກສັດແຕ່ລະຄົນໄດ້ຖືກຄິດໄລ່ໂດຍໃຊ້ MATLAB script ອັດຕະໂນມັດ (R2020a, MathWorks) ດັ່ງທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ກ່ອນຫນ້ານີ້ 28, ໂດຍໃຊ້ການຕັ້ງຄ່າ 0.35 < Hue < 0.58, Saturation > 0.15, ແລະຄ່າ < 0.7. Площадь экспрессии LacZ в составных изображениях трахеи от каждого животного была количественно определена с использованием автоматизированного сценария MATLAB (R2020a, MathWorks), как описано ранее28, с использованием настроек 0,35 <оттенок <0,58, насыщенность> 0,15 и значение <0 ,7. ພື້ນທີ່ຂອງການສະແດງອອກ LacZ ໃນຮູບພາບ tracheal ປະສົມຈາກສັດແຕ່ລະຄົນໄດ້ຖືກຄິດໄລ່ໂດຍໃຊ້ສະຄິບ MATLAB ອັດຕະໂນມັດ (R2020a, MathWorks) ດັ່ງທີ່ໄດ້ອະທິບາຍກ່ອນຫນ້ານີ້ 28 ໂດຍໃຊ້ການຕັ້ງຄ່າ 0.35.0.15 ແລະຄ່າ<0 .7.如前所前所, 使用自动 Matlab 脚本 matlab 脚本脚本表达表达表达 lacz 表达, 色调 0.38 <色调 <0.58, 0.15 和值> <0.7 的的的的的和值和值设置设置的设置设置的设置设置设置设置设置设置和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值设置和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值和值.如前所前所, 自动自动 Matlab 脚本 matlab 脚本脚本来自的的使用使用使用使用来自 0.35 <色调 <0.55,> 0.7 和值 <0.7 的. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Области экспрессии LacZ на составных изображениях трахеи каждого животного количественно определяли с использованием автоматизированного сценария MATLAB (R2020a, MathWorks), как описано ранее, с использованием настроек 0,35 <оттенок <0,58, насыщенность> 0,15 и значение <0,7 . ພື້ນທີ່ຂອງການສະແດງອອກຂອງ LacZ ໃນຮູບປະກອບຂອງ trachea ຂອງສັດແຕ່ລະຄົນໄດ້ຖືກຄິດໄລ່ໂດຍໃຊ້ MATLAB script ອັດຕະໂນມັດ (R2020a, MathWorks) ດັ່ງທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ກ່ອນຫນ້ານີ້ໂດຍໃຊ້ການຕັ້ງຄ່າ 0.35 < hue < 0.58, saturation > 0.15 ແລະຄ່າ < 0.7.ໂດຍການຕິດຕາມຮູບຮ່າງຂອງເນື້ອເຍື່ອໃນ GIMP v2.10.24, ຫນ້າກາກໄດ້ຖືກສ້າງຂື້ນດ້ວຍຕົນເອງສໍາລັບແຕ່ລະຮູບພາບປະສົມເພື່ອກໍານົດພື້ນທີ່ເນື້ອເຍື່ອແລະປ້ອງກັນການກວດພົບທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງຢູ່ນອກເນື້ອເຍື່ອ tracheal.ພື້ນທີ່ທີ່ມີຮອຍເປື້ອນຈາກຮູບປະກອບທັງໝົດຈາກສັດແຕ່ລະໂຕແມ່ນໄດ້ຖືກສະຫຼຸບເພື່ອໃຫ້ພື້ນທີ່ທີ່ມີຮອຍເປື້ອນທັງໝົດຂອງສັດນັ້ນ.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ພື້ນທີ່ທີ່ຖືກທາສີໄດ້ຖືກແບ່ງອອກໂດຍພື້ນທີ່ທັງຫມົດຂອງຫນ້າກາກເພື່ອໃຫ້ໄດ້ພື້ນທີ່ປົກກະຕິ.
ແຕ່ລະ trachea ໄດ້ຖືກຝັງຢູ່ໃນ paraffin ແລະພາກສ່ວນຫນາ 5 µm.ພາກສ່ວນຕ່າງໆຖືກຂັດດ້ວຍສີແດງໄວທີ່ເປັນກາງເປັນເວລາ 5 ນາທີ ແລະຮູບພາບຕ່າງໆໄດ້ມາໂດຍໃຊ້ກ້ອງຈຸລະທັດ Nikon Eclipse E400, ກ້ອງຖ່າຍຮູບ DS-Fi3 ແລະຊອບແວຈັບອົງປະກອບ NIS (ເວີຊັນ 5.20.00).
ການວິເຄາະສະຖິຕິທັງໝົດໄດ້ຖືກປະຕິບັດໃນ GraphPad Prism v9 (GraphPad Software, Inc.).ຄວາມສໍາຄັນທາງສະຖິຕິໄດ້ຖືກກໍານົດຢູ່ທີ່ p ≤ 0.05.ຄວາມປົກກະຕິໄດ້ຖືກທົດສອບໂດຍໃຊ້ການທົດສອບ Shapiro-Wilk ແລະຄວາມແຕກຕ່າງຂອງການ staining LacZ ໄດ້ຖືກປະເມີນໂດຍໃຊ້ t-test unpaired.
ຫົກ MPs ທີ່ອະທິບາຍໄວ້ໃນຕາຕະລາງ 1 ໄດ້ຖືກກວດກາໂດຍ PCXI, ແລະການເບິ່ງເຫັນແມ່ນໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ໃນຕາຕະລາງ 2. ສອງ polystyrene MPs (MP1 ແລະ MP2; 18 µm ແລະ 0.25 µm, ຕາມລໍາດັບ) ບໍ່ສັງເກດເຫັນໂດຍ PCXI, ແຕ່ຕົວຢ່າງທີ່ຍັງເຫຼືອສາມາດກໍານົດໄດ້. (ຕົວຢ່າງແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບ 5).MP3 ແລະ MP4 ແມ່ນເຫັນໄດ້ອ່ອນໆ (10-15% Fe3O4; 0.25 µm ແລະ 0.9 µm, ຕາມລໍາດັບ).ເຖິງແມ່ນວ່າ MP5 (98% Fe3O4; 0.25 µm) ມີບາງອະນຸພາກທີ່ນ້ອຍທີ່ສຸດທີ່ທົດສອບ, ມັນແມ່ນການອອກສຽງຫຼາຍທີ່ສຸດ.ຜະລິດຕະພັນ CombiMag MP6 ແມ່ນຍາກທີ່ຈະຈໍາແນກ.ໃນທຸກໆກໍລະນີ, ຄວາມສາມາດໃນການກວດຫາ MFs ຂອງພວກເຮົາໄດ້ຖືກປັບປຸງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໂດຍການຍ້າຍແມ່ເຫຼັກໄປຂ້າງຫນ້າຂະຫນານກັບ capillary.ໃນຂະນະທີ່ແມ່ເຫຼັກເຄື່ອນຍ້າຍອອກຈາກເສັ້ນຜ່າສູນກາງ, ອະນຸພາກໄດ້ຖືກດຶງອອກເປັນສາຍໂສ້ຍາວ, ແຕ່ເມື່ອແມ່ເຫຼັກເຂົ້າມາໃກ້ ແລະ ຄວາມແຮງຂອງສະໜາມແມ່ເຫຼັກເພີ່ມຂຶ້ນ, ໂສ້ຂອງອະນຸພາກຈະສັ້ນລົງ ເນື່ອງຈາກອະນຸພາກເຄື່ອນຍ້າຍໄປສູ່ພື້ນຜິວດ້ານເທິງຂອງເສັ້ນປະສາດ (ເບິ່ງວີດີໂອເສີມ S1. : MP4), ເພີ່ມຄວາມຫນາແຫນ້ນຂອງອະນຸພາກຢູ່ດ້ານ.ໃນທາງກັບກັນ, ເມື່ອແມ່ເຫຼັກຖືກໂຍກຍ້າຍອອກຈາກ capillary, ຄວາມແຂງແຮງຂອງພາກສະຫນາມຫຼຸດລົງແລະ MPs rearrange ເຂົ້າໄປໃນຕ່ອງໂສ້ຍາວທີ່ຂະຫຍາຍຈາກດ້ານເທິງຂອງ capillary (ເບິ່ງວິດີໂອເສີມ S2: MP4).ຫຼັງຈາກແມ່ເຫຼັກຢຸດການເຄື່ອນຍ້າຍ, ອະນຸພາກຍັງສືບຕໍ່ເຄື່ອນຍ້າຍເປັນບາງເວລາຫຼັງຈາກເຖິງຕໍາແຫນ່ງສົມດຸນ.ໃນຂະນະທີ່ MP ເຄື່ອນໄປຫາແລະຫ່າງຈາກດ້ານເທິງຂອງ capillary, ອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກມີແນວໂນ້ມທີ່ຈະແຕ້ມ debris ຜ່ານຂອງແຫຼວ.
ການເບິ່ງເຫັນຂອງ MP ພາຍໃຕ້ PCXI ແຕກຕ່າງກັນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍລະຫວ່າງຕົວຢ່າງ.(a) MP3, (b) MP4, (c) MP5 ແລະ (d) MP6.ຮູບພາບທັງໝົດທີ່ສະແດງຢູ່ນີ້ແມ່ນຖ່າຍດ້ວຍແມ່ເຫຼັກທີ່ຕັ້ງຢູ່ປະມານ 10 ມມ ໂດຍກົງຢູ່ເໜືອເສັ້ນຜ່າກາງ.ຮູບວົງມົນຂະຫນາດໃຫຍ່ທີ່ປາກົດຂື້ນແມ່ນຟອງອາກາດທີ່ຕິດຢູ່ໃນເສັ້ນປະສາດ capillaries, ສະແດງໃຫ້ເຫັນຢ່າງຊັດເຈນລັກສະນະຂອງຂອບສີດໍາແລະສີຂາວຂອງຮູບພາບກົງກັນຂ້າມໄລຍະ.ກ່ອງສີແດງສະແດງເຖິງການຂະຫຍາຍທີ່ເພີ່ມຄວາມຄົມຊັດ.ໃຫ້ສັງເກດວ່າເສັ້ນຜ່າສູນກາງຂອງວົງຈອນແມ່ເຫຼັກໃນຮູບທັງຫມົດແມ່ນບໍ່ຂະຫນາດແລະມີປະມານ 100 ເທົ່າຂະຫນາດໃຫຍ່ກ່ວາສະແດງໃຫ້ເຫັນ.
ໃນຂະນະທີ່ແມ່ເຫຼັກເຄື່ອນຍ້າຍໄປຊ້າຍແລະຂວາຕາມທາງເທິງຂອງ capillary, ມຸມຂອງສາຍ MP ປ່ຽນແປງເພື່ອສອດຄ່ອງກັບແມ່ເຫຼັກ (ເບິ່ງຮູບທີ່ 6), ດັ່ງນັ້ນການກໍານົດເສັ້ນພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກ.ສໍາລັບ MP3-5, ຫຼັງຈາກ chord ຮອດມຸມໃກ້ຈະເຂົ້າສູ່, particles drag ຕາມດ້ານເທິງຂອງ capillary ໄດ້.ອັນນີ້ມັກຈະສົ່ງຜົນໃຫ້ MPs ເຕົ້າໂຮມກັນເປັນກຸ່ມໃຫຍ່ໆຢູ່ໃກ້ກັບບ່ອນທີ່ສະໜາມແມ່ເຫຼັກເຂັ້ມແຂງທີ່ສຸດ (ເບິ່ງວິດີໂອເສີມ S3: MP5).ນີ້ຍັງເຫັນໄດ້ຊັດເຈນໂດຍສະເພາະໃນເວລາທີ່ການຖ່າຍຮູບຢູ່ໃກ້ກັບປາຍຂອງ capillary, ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ MP ລວບລວມແລະສຸມໃສ່ການໂຕ້ຕອບຂອງແຫຼວທາງອາກາດ.ອະນຸພາກໃນ MP6, ເຊິ່ງຍາກທີ່ຈະແຍກແຍະໃນ MP3-5, ບໍ່ໄດ້ລາກເມື່ອແມ່ເຫຼັກເຄື່ອນທີ່ຕາມເສັ້ນສາຍ capillary, ແຕ່ສາຍ MP ໄດ້ແຍກຕົວອອກ, ເຮັດໃຫ້ອະນຸພາກຢູ່ໃນມຸມເບິ່ງ (ເບິ່ງວີດີໂອເສີມ S4: MP6).ໃນບາງກໍລະນີ, ເມື່ອສະຫນາມແມ່ເຫຼັກທີ່ໃຊ້ໄດ້ຖືກຫຼຸດລົງໂດຍການຍ້າຍແມ່ເຫຼັກເປັນໄລຍະທາງໄກຈາກສະຖານທີ່ຮູບພາບ, MPs ໃດໆທີ່ຍັງເຫຼືອໄດ້ຄ່ອຍໆລົງໄປຫາພື້ນຜິວລຸ່ມຂອງທໍ່ໂດຍແຮງໂນ້ມຖ່ວງ, ຍັງຄົງຢູ່ໃນສາຍ (ເບິ່ງວິດີໂອເສີມ S5: MP3) .
ມຸມຂອງສາຍ MP ປ່ຽນແປງເມື່ອແມ່ເຫຼັກເຄື່ອນຍ້າຍໄປທາງຂວາເທິງ capillary.(a) MP3, (b) MP4, (c) MP5 ແລະ (d) MP6.ກ່ອງສີແດງສະແດງເຖິງການຂະຫຍາຍທີ່ເພີ່ມຄວາມຄົມຊັດ.ກະລຸນາຮັບຊາບວ່າວິດີໂອເພີ່ມເຕີມແມ່ນເພື່ອຈຸດປະສົງໃຫ້ຂໍ້ມູນຍ້ອນວ່າພວກມັນເປີດເຜີຍໂຄງສ້າງອະນຸພາກທີ່ສໍາຄັນແລະຂໍ້ມູນແບບເຄື່ອນໄຫວທີ່ບໍ່ສາມາດເບິ່ງເຫັນໄດ້ໃນຮູບພາບຄົງທີ່ເຫຼົ່ານີ້.
ການທົດສອບຂອງພວກເຮົາໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການເຄື່ອນຍ້າຍແມ່ເຫຼັກກັບຄືນໄປບ່ອນແລະອອກໄປຊ້າໆຕາມ trachea ອໍານວຍຄວາມສະດວກໃນການເບິ່ງເຫັນຂອງ MF ໃນສະພາບການຂອງການເຄື່ອນໄຫວທີ່ສັບສົນໃນ vivo.ບໍ່ມີການທົດສອບໃນ vivo ໄດ້ຖືກປະຕິບັດເນື່ອງຈາກວ່າລູກປັດ polystyrene (MP1 ແລະ MP2) ບໍ່ສັງເກດເຫັນຢູ່ໃນ capillary ໄດ້.ແຕ່ລະສີ່ MFs ທີ່ຍັງເຫຼືອໄດ້ຖືກທົດສອບໃນ vivo ດ້ວຍແກນຍາວຂອງແມ່ເຫຼັກຕັ້ງຢູ່ເທິງ trachea ໃນມຸມປະມານ 30 °ກັບແນວຕັ້ງ (ເບິ່ງຮູບ 2b ແລະ 3a), ຍ້ອນວ່ານີ້ເຮັດໃຫ້ຕ່ອງໂສ້ MF ຍາວແລະມີປະສິດທິພາບຫຼາຍຂຶ້ນ. ກ່ວາແມ່ເຫຼັກ..ສິ້ນສຸດການຕັ້ງຄ່າແລ້ວ.MP3, MP4 ແລະ MP6 ບໍ່ໄດ້ພົບເຫັນຢູ່ໃນ trachea ຂອງສັດທີ່ມີຊີວິດໃດໆ.ເມື່ອເຫັນພາບທາງເດີນຫາຍໃຈຂອງໜູຫຼັງຈາກຂ້າສັດຢ່າງມະນຸດສະທຳ, ອະນຸພາກຍັງຄົງເບິ່ງບໍ່ເຫັນ ເຖິງແມ່ນວ່າຈະເພີ່ມປະລິມານເພີ່ມເຕີມໂດຍໃຊ້ປ້ຳເຂັມສັກຢາ.MP5 ມີເນື້ອໃນອອກໄຊຂອງທາດເຫຼັກທີ່ສູງທີ່ສຸດ ແລະເປັນອະນຸພາກທີ່ເບິ່ງເຫັນໄດ້ຢ່າງດຽວ, ດັ່ງນັ້ນມັນຈຶ່ງຖືກໃຊ້ເພື່ອປະເມີນ ແລະສະແດງພຶດຕິກຳຂອງ MP ໃນ vivo.
ການຈັດວາງຂອງແມ່ເຫຼັກຢູ່ເທິງ trachea ໃນລະຫວ່າງການໃສ່ MF ສົ່ງຜົນໃຫ້ຫຼາຍໆຄົນ, ແຕ່ບໍ່ແມ່ນທັງຫມົດ, MFs ຖືກສຸມໃສ່ໃນພາກສະຫນາມຂອງມຸມເບິ່ງ.ການເຂົ້າສູ່ tracheal ຂອງອະນຸພາກແມ່ນສັງເກດເຫັນດີທີ່ສຸດໃນສັດ euthanized humanely.ຮູບທີ່ 7 ແລະວິດີໂອເສີມ S6: MP5 ສະແດງໃຫ້ເຫັນການຈັບແມ່ເຫຼັກຢ່າງໄວວາແລະການສອດຄ່ອງຂອງອະນຸພາກຢູ່ດ້ານຂອງ trachea ventral, ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ MPs ສາມາດຖືກເປົ້າຫມາຍໃສ່ພື້ນທີ່ທີ່ຕ້ອງການຂອງ trachea.ໃນເວລາທີ່ຊອກຫາ distally ຫຼາຍຕາມ trachea ຫຼັງຈາກການຈັດສົ່ງ MF, ບາງ MFs ໄດ້ຖືກພົບເຫັນຢູ່ໃກ້ກັບ carina, ເຊິ່ງຊີ້ໃຫ້ເຫັນຄວາມເຂັ້ມແຂງຂອງພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກບໍ່ພຽງພໍເພື່ອເກັບກໍາແລະຖື MFs ທັງຫມົດ, ນັບຕັ້ງແຕ່ພວກເຂົາເຈົ້າໄດ້ຖືກສົ່ງຜ່ານພາກພື້ນຂອງຄວາມເຂັ້ມແຂງພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກສູງສຸດໃນລະຫວ່າງການບໍລິຫານນ້ໍາ.ຂະ​ບວນ​ການ.ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ MP ຫລັງເກີດແມ່ນສູງກວ່າຮອບພື້ນທີ່ຮູບພາບ, ແນະນໍາວ່າ MPs ຈໍານວນຫຼາຍຍັງຄົງຢູ່ໃນເຂດເສັ້ນທາງຫາຍໃຈບ່ອນທີ່ຄວາມແຮງຂອງພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກສູງສຸດ.
ຮູບພາບຂອງ (a) ກ່ອນແລະ (b) ຫຼັງຈາກການຈັດສົ່ງຂອງ MP5 ເຂົ້າໄປໃນ trachea ຂອງຫນູ euthanized ບໍ່ດົນມານີ້ທີ່ມີແມ່ເຫຼັກທີ່ວາງໄວ້ຂ້າງເທິງພື້ນທີ່ຮູບພາບ.ພື້ນທີ່ສະແດງແມ່ນຕັ້ງຢູ່ລະຫວ່າງສອງວົງ cartilaginous.ມີນ້ໍາບາງຢູ່ໃນເສັ້ນທາງຫາຍໃຈກ່ອນທີ່ MP ຈະຖືກສົ່ງ.ກ່ອງສີແດງສະແດງເຖິງການຂະຫຍາຍທີ່ເພີ່ມຄວາມຄົມຊັດ.ຮູບ​ພາບ​ເຫຼົ່າ​ນີ້​ແມ່ນ​ເອົາ​ມາ​ຈາກ​ວິ​ດີ​ໂອ​ທີ່​ສະ​ແດງ​ໃຫ້​ເຫັນ​ໃນ S6​: MP5 ວິ​ດີ​ໂອ​ເສີມ​.
ການເຄື່ອນຍ້າຍແມ່ເຫຼັກຕາມ trachea ໃນ vivo ເຮັດໃຫ້ເກີດການປ່ຽນແປງຂອງມຸມຂອງລະບົບຕ່ອງໂສ້ MP ເທິງຫນ້າດິນຂອງທໍ່ຫາຍໃຈ, ຄ້າຍຄືກັນກັບທີ່ສັງເກດເຫັນໃນ capillaries (ເບິ່ງຮູບ 8 ແລະວິດີໂອເສີມ S7: MP5).ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ໃນການສຶກສາຂອງພວກເຮົາ, MPs ບໍ່ສາມາດຖືກລາກໄປຕາມຫນ້າດິນຂອງເສັ້ນທາງຫາຍໃຈທີ່ມີຊີວິດຢູ່, ຍ້ອນວ່າ capillaries ສາມາດເຮັດໄດ້.ໃນບາງກໍລະນີ, ລະບົບຕ່ອງໂສ້ MP ຍາວຂຶ້ນຍ້ອນວ່າແມ່ເຫຼັກເຄື່ອນທີ່ຊ້າຍແລະຂວາ.ຫນ້າສົນໃຈ, ພວກເຮົາຍັງພົບວ່າລະບົບຕ່ອງໂສ້ອະນຸພາກປ່ຽນແປງຄວາມເລິກຂອງຊັ້ນຫນ້າດິນຂອງນ້ໍາໃນເວລາທີ່ແມ່ເຫຼັກເຄື່ອນຍ້າຍຕາມລວງຍາວຕາມ trachea, ແລະຂະຫຍາຍອອກເມື່ອແມ່ເຫຼັກຖືກຍ້າຍໂດຍກົງຢູ່ເທິງຫົວແລະລະບົບຕ່ອງໂສ້ particle ຈະຖືກຫມຸນໄປສູ່ຕໍາແຫນ່ງຕັ້ງ (ເບິ່ງ. ວິດີໂອເສີມ S7).: MP5 ຢູ່ 0:09, ລຸ່ມຂວາ).ຮູບແບບການເຄື່ອນໄຫວຂອງລັກສະນະມີການປ່ຽນແປງເມື່ອແມ່ເຫຼັກໄດ້ຖືກເຄື່ອນຍ້າຍໄປຂ້າງຫນ້າໃນທົ່ວດ້ານເທິງຂອງ trachea (ເຊັ່ນ, ໄປທາງຊ້າຍຫຼືຂວາຂອງສັດ, ແທນທີ່ຈະຕາມຄວາມຍາວຂອງ trachea).ອະນຸພາກຍັງເຫັນໄດ້ຊັດເຈນໃນລະຫວ່າງການເຄື່ອນທີ່ຂອງພວກມັນ, ແຕ່ເມື່ອແມ່ເຫຼັກໄດ້ຖືກໂຍກຍ້າຍອອກຈາກ trachea, ຄໍາແນະນໍາຂອງສາຍອະນຸພາກໄດ້ກາຍເປັນສັງເກດເຫັນ (ເບິ່ງວິດີໂອເສີມ S8: MP5, ເລີ່ມແຕ່ເວລາ 0:08).ນີ້ຕົກລົງກັບພຶດຕິກໍາທີ່ສັງເກດເຫັນຂອງສະຫນາມແມ່ເຫຼັກພາຍໃຕ້ການປະຕິບັດຂອງພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກທີ່ໃຊ້ໃນ capillary ແກ້ວ.
ຮູບພາບຕົວຢ່າງສະແດງໃຫ້ເຫັນ MP5 ໃນ trachea ຂອງຫນູທີ່ມີຊີວິດ anesthetized.(a) ແມ່ເຫຼັກຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອໃຫ້ໄດ້ຮູບພາບຂ້າງເທິງແລະຊ້າຍຂອງ trachea, ຫຼັງຈາກນັ້ນ (b) ຫຼັງຈາກຍ້າຍແມ່ເຫຼັກໄປທາງຂວາ.ກ່ອງສີແດງສະແດງເຖິງການຂະຫຍາຍທີ່ເພີ່ມຄວາມຄົມຊັດ.ຮູບພາບເຫຼົ່ານີ້ແມ່ນມາຈາກວິດີໂອທີ່ສະແດງຢູ່ໃນວິດີໂອເສີມຂອງ S7's: MP5.
ໃນເວລາທີ່ທັງສອງເສົາໄດ້ຖືກປັບຢູ່ໃນທິດທາງທິດເຫນືອ - ໃຕ້ຂ້າງເທິງແລະຂ້າງລຸ່ມຂອງ trachea (ເຊັ່ນ: ການດຶງດູດ; ຮູບ 3b), ແຜ່ນ MP ປາກົດຍາວແລະຕັ້ງຢູ່ເທິງກໍາແພງຂ້າງຂອງ trachea ແທນທີ່ຈະຢູ່ດ້ານຫລັງຂອງທໍ່. trachea (ເບິ່ງເອກະສານຊ້ອນທ້າຍ).ວິດີໂອ S9:MP5).ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສູງຂອງອະນຸພາກຢູ່ບ່ອນຫນຶ່ງ (ເຊັ່ນ: ດ້ານຫຼັງຂອງ trachea) ບໍ່ໄດ້ຖືກກວດພົບຫຼັງຈາກການບໍລິຫານນ້ໍາໂດຍໃຊ້ອຸປະກອນແມ່ເຫຼັກຄູ່, ເຊິ່ງມັກຈະເກີດຂື້ນກັບອຸປະກອນແມ່ເຫຼັກດຽວ.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ໃນເວລາທີ່ແມ່ເຫຼັກຫນຶ່ງໄດ້ຖືກຕັ້ງຄ່າເພື່ອ repel ກົງກັນຂ້າມ poles (ຮູບ 3c), ຈໍານວນຂອງ particles ສັງເກດເຫັນໃນພາກສະຫນາມຂອງການເບິ່ງບໍ່ໄດ້ເພີ່ມຂຶ້ນຫຼັງຈາກການຈັດສົ່ງ.ການຕັ້ງຄ່າແມ່ເຫຼັກທັງສອງແມ່ນເປັນສິ່ງທ້າທາຍອັນເນື່ອງມາຈາກຄວາມແຮງຂອງສະຫນາມແມ່ເຫຼັກສູງທີ່ດຶງດູດຫຼື pushes ແມ່ເຫຼັກຕາມລໍາດັບ.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ການຕິດຕັ້ງໄດ້ຖືກປ່ຽນເປັນແມ່ເຫຼັກດຽວຂະຫນານກັບສາຍການບິນແຕ່ຜ່ານທາງເດີນຫາຍໃຈໃນມຸມ 90 ອົງສາເພື່ອໃຫ້ສາຍຂອງແຮງຂ້າມຜ່ານຝາ tracheal ເປັນທາງຂວາງ (ຮູບ 3d), ທິດທາງທີ່ມີຈຸດປະສົງເພື່ອກໍານົດຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງການລວບລວມອະນຸພາກ. ກໍາແພງຂ້າງ.ສັງເກດເຫັນ.ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ໃນການຕັ້ງຄ່ານີ້, ບໍ່ມີການເຄື່ອນໄຫວສະສົມ MF ຫຼືການເຄື່ອນໄຫວຂອງແມ່ເຫຼັກທີ່ສາມາດກໍານົດໄດ້.ອີງຕາມຜົນໄດ້ຮັບທັງຫມົດເຫຼົ່ານີ້, ການຕັ້ງຄ່າທີ່ມີແມ່ເຫຼັກດຽວແລະທິດທາງ 30 ອົງສາໄດ້ຖືກເລືອກສໍາລັບການສຶກສາ vivo ຂອງຜູ້ໃຫ້ບໍລິການ gene (ຮູບ 3a).
ເມື່ອສັດໄດ້ຖືກຮູບຫຼາຍຄັ້ງທັນທີຫຼັງຈາກການເສຍສະລະຂອງມະນຸດ, ການຂາດການເຄື່ອນໄຫວຂອງເນື້ອເຍື່ອແຊກແຊງຫມາຍຄວາມວ່າເສັ້ນອະນຸພາກທີ່ສັ້ນກວ່າສາມາດເຫັນໄດ້ຊັດເຈນໃນພາກສະຫນາມ intercartilaginous ທີ່ຊັດເຈນ, 'swaying' ອີງຕາມການເຄື່ອນໄຫວແປຂອງແມ່ເຫຼັກ.ເຫັນ​ໄດ້​ຊັດ​ເຈນ​ທີ່​ມີ​ແລະ​ການ​ເຄື່ອນ​ໄຫວ​ຂອງ MP6 particles​.
titer ຂອງ LV-LacZ ແມ່ນ 1.8 x 108 IU/mL, ແລະຫຼັງຈາກປະສົມ 1:1 ກັບ CombiMag MP (MP6), ສັດໄດ້ຖືກສັກດ້ວຍ 50 µl ຂອງປະລິມານ tracheal ຂອງ 9 x 107 IU/ml ຂອງ LV ຍານພາຫະນະ (ເຊັ່ນ: 4.5. x 106 TU/rat).).ໃນການສຶກສາເຫຼົ່ານີ້, ແທນທີ່ຈະຍ້າຍແມ່ເຫຼັກໃນລະຫວ່າງການອອກແຮງງານ, ພວກເຮົາໄດ້ສ້ອມແຊມແມ່ເຫຼັກຢູ່ໃນຕໍາແຫນ່ງຫນຶ່ງເພື່ອກໍານົດວ່າການຖ່າຍທອດ LV ສາມາດ (a) ໄດ້ຮັບການປັບປຸງເມື່ອທຽບກັບການສົ່ງ vector ໃນກໍລະນີທີ່ບໍ່ມີພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກ, ແລະ (b) ຖ້າເສັ້ນທາງຫາຍໃຈສາມາດ. ຈະສຸມໃສ່.ຈຸລັງທີ່ຖືກຖ່າຍທອດຢູ່ໃນພື້ນທີ່ເປົ້າຫມາຍແມ່ເຫຼັກຂອງເສັ້ນທາງຫາຍໃຈເທິງ.
ການປະກົດຕົວຂອງແມ່ເຫຼັກແລະການນໍາໃຊ້ CombiMag ປະສົມປະສານກັບ vectors LV ບໍ່ໄດ້ປະກົດວ່າມີຜົນກະທົບທາງລົບຕໍ່ສຸຂະພາບຂອງສັດ, ເຊັ່ນດຽວກັບໂປໂຕຄອນການຈັດສົ່ງ vector LV ມາດຕະຖານຂອງພວກເຮົາ.ຮູບພາບດ້ານຫນ້າຂອງພາກພື້ນ tracheal ໄດ້ຮັບການລົບກວນກົນຈັກ (ຕື່ມ Fig. 1) ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າກຸ່ມ LV-MP ທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວມີລະດັບ transduction ສູງຂຶ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນທີ່ປະທັບຂອງແມ່ເຫຼັກ (ຮູບ 9a).ມີພຽງແຕ່ຈໍານວນຫນ້ອຍຂອງການ staining ສີຟ້າ LacZ ທີ່ມີຢູ່ໃນກຸ່ມຄວບຄຸມ (ຮູບ 9b).ປະລິມານຂອງເຂດປົກກະຕິ X-Gal-stained ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການບໍລິຫານຂອງ LV-MP ໃນທີ່ປະທັບຂອງສະຫນາມແມ່ເຫຼັກເຮັດໃຫ້ການປັບປຸງປະມານ 6 ເທົ່າ (ຮູບ 9c).
ຕົວຢ່າງຂອງຮູບພາບປະກອບທີ່ສະແດງໃຫ້ເຫັນການຖ່າຍທອດ tracheal ກັບ LV-MP (a) ໃນທີ່ປະທັບຂອງສະຫນາມແມ່ເຫຼັກແລະ (b) ໃນກໍລະນີທີ່ບໍ່ມີແມ່ເຫຼັກ.(c) ການປັບປຸງທີ່ສໍາຄັນທາງສະຖິຕິໃນພື້ນທີ່ປົກກະຕິຂອງການຖ່າຍທອດ LacZ ໃນ trachea ດ້ວຍການໃຊ້ແມ່ເຫຼັກ (*p = 0.029, t-test, n = 3 ຕໍ່ກຸ່ມ, ± ຄວາມຜິດພາດມາດຕະຖານຂອງຄ່າສະເລ່ຍ).
ພາກສ່ວນທີ່ມີຮອຍດ່າງສີແດງໄວທີ່ເປັນກາງ (ຕົວຢ່າງທີ່ສະແດງໃຫ້ເຫັນໃນຮູບການເສີມ 2) ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າຈຸລັງ LacZ-stained ມີຢູ່ໃນຕົວຢ່າງດຽວກັນແລະຢູ່ໃນສະຖານທີ່ດຽວກັນກັບລາຍງານກ່ອນຫນ້ານີ້.
ສິ່ງທ້າທາຍທີ່ສໍາຄັນໃນການປິ່ນປົວ gene ທາງອາກາດຍັງຄົງເປັນທ້ອງຖິ່ນທີ່ຊັດເຈນຂອງ particles carrier ໃນເຂດທີ່ມີຄວາມສົນໃຈແລະຜົນສໍາເລັດຂອງລະດັບສູງຂອງປະສິດທິພາບ transduction ໃນປອດມືຖືໃນທີ່ປະທັບຂອງ airflow ແລະ mucus clearance ການເຄື່ອນໄຫວ.ສໍາລັບຜູ້ຂົນສົ່ງ LV ທີ່ມີຈຸດປະສົງເພື່ອປິ່ນປົວພະຍາດທາງເດີນຫາຍໃຈໃນໂຣກ fibrosis cystic, ການເພີ່ມເວລາທີ່ຢູ່ອາໄສຂອງອະນຸພາກຜູ້ຂົນສົ່ງໃນເສັ້ນທາງຫາຍໃຈແມ່ນເປັນເປົ້າຫມາຍທີ່ບໍ່ສາມາດບັນລຸໄດ້.ດັ່ງທີ່ຊີ້ໃຫ້ເຫັນໂດຍ Castellani et al., ການນໍາໃຊ້ພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກເພື່ອເສີມຂະຫຍາຍ transduction ມີຂໍ້ດີຫຼາຍກວ່າວິທີການສົ່ງ gene ອື່ນໆເຊັ່ນ electroporation ເນື່ອງຈາກວ່າມັນສາມາດສົມທົບຄວາມງ່າຍດາຍ, ເສດຖະກິດ, ການຈັດສົ່ງທ້ອງຖິ່ນ, ປະສິດທິພາບເພີ່ມຂຶ້ນ, ແລະໄລຍະເວລາ incubation ສັ້ນ.ແລະ​ອາດ​ຈະ​ເປັນ​ປະລິມານ​ລົດ​ຕ່ຳ​ກວ່າ 10.ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ໃນ vivo ເງິນຝາກແລະພຶດຕິກໍາຂອງອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກຢູ່ໃນເສັ້ນທາງຫາຍໃຈພາຍໃຕ້ອິດທິພົນຂອງກໍາລັງແມ່ເຫຼັກພາຍນອກບໍ່ເຄີຍໄດ້ຖືກອະທິບາຍ, ແລະໃນຄວາມເປັນຈິງຄວາມສາມາດຂອງວິທີການນີ້ເພື່ອເພີ່ມລະດັບການສະແດງອອກຂອງ gene ໃນເສັ້ນທາງຫາຍໃຈ intact ຍັງບໍ່ທັນໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນໃນ vivo.
ການທົດລອງໃນ vitro ຂອງພວກເຮົາກ່ຽວກັບ PCXI synchrotron ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າອະນຸພາກທັງຫມົດທີ່ພວກເຮົາໄດ້ທົດສອບ, ຍົກເວັ້ນ MP polystyrene, ແມ່ນເຫັນໄດ້ໃນການຕິດຕັ້ງຮູບພາບທີ່ພວກເຮົາໃຊ້.ໃນທີ່ປະທັບຂອງສະຫນາມແມ່ເຫຼັກ, ພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກປະກອບເປັນສາຍ, ຄວາມຍາວຂອງທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບປະເພດຂອງອະນຸພາກແລະຄວາມເຂັ້ມແຂງຂອງສະຫນາມແມ່ເຫຼັກ (ie, ຄວາມໃກ້ຊິດແລະການເຄື່ອນໄຫວຂອງແມ່ເຫຼັກ).ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 10, ສາຍເຊືອກທີ່ພວກເຮົາສັງເກດເຫັນແມ່ນສ້າງຕັ້ງຂຶ້ນຍ້ອນວ່າແຕ່ລະອະນຸພາກແຕ່ລະຄົນກາຍເປັນແມ່ເຫຼັກແລະ induces ພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກທ້ອງຖິ່ນຂອງຕົນເອງ.ທົ່ງນາທີ່ແຍກຕ່າງຫາກເຫຼົ່ານີ້ເຮັດໃຫ້ເກີດອະນຸພາກທີ່ຄ້າຍຄືກັນອື່ນໆເພື່ອເກັບກໍາແລະເຊື່ອມຕໍ່ກັບການເຄື່ອນໄຫວຂອງກຸ່ມເນື່ອງຈາກກໍາລັງທ້ອງຖິ່ນຈາກກໍາລັງທ້ອງຖິ່ນຂອງການດຶງດູດແລະການ repulsion ຂອງອະນຸພາກອື່ນໆ.
ແຜນ​ວາດ​ສະ​ແດງ​ໃຫ້​ເຫັນ (a, b) ຕ່ອງ​ໂສ້​ຂອງ​ອະ​ນຸ​ພາກ​ປະ​ກອບ​ເປັນ​ຢູ່​ໃນ capillaries ທີ່​ເຕັມ​ໄປ​ດ້ວຍ​ນ​້​ໍ​າ​ແລະ (c, d​) trachea ເຕັມ​ໄປ​ດ້ວຍ​ອາ​ກາດ​.ໃຫ້ສັງເກດວ່າເສັ້ນເລືອດຝອຍແລະ trachea ບໍ່ໄດ້ຖືກແຕ້ມເພື່ອຂະຫນາດ.ກະດານ (a) ຍັງປະກອບດ້ວຍຄໍາອະທິບາຍຂອງ MF ທີ່ມີອະນຸພາກ Fe3O4 ຈັດລຽງເປັນຕ່ອງໂສ້.
ເມື່ອແມ່ເຫຼັກເຄື່ອນຍ້າຍໄປທົ່ວ capillary, ມຸມຂອງສາຍອະນຸພາກໄດ້ບັນລຸເຖິງຈຸດສໍາຄັນສໍາລັບ MP3-5 ທີ່ບັນຈຸ Fe3O4, ຫຼັງຈາກນັ້ນສາຍອະນຸພາກບໍ່ຢູ່ໃນຕໍາແຫນ່ງເດີມ, ແຕ່ໄດ້ຍ້າຍຕາມຫນ້າດິນກັບຕໍາແຫນ່ງໃຫມ່.ແມ່ເຫຼັກ.ຜົນກະທົບນີ້ອາດຈະເກີດຂຶ້ນເນື່ອງຈາກວ່າຫນ້າດິນຂອງ capillary ແກ້ວແມ່ນກ້ຽງພຽງພໍທີ່ຈະອະນຸຍາດໃຫ້ການເຄື່ອນໄຫວນີ້ເກີດຂຶ້ນ.ຫນ້າສົນໃຈ, MP6 (CombiMag) ບໍ່ໄດ້ປະຕິບັດຕົວແບບນີ້, ບາງທີອາດເປັນຍ້ອນວ່າອະນຸພາກມີຂະຫນາດນ້ອຍກວ່າ, ມີການເຄືອບຫຼືຄ່າໃຊ້ຈ່າຍຂອງພື້ນຜິວທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ຫຼືນ້ໍາຂອງຜູ້ໃຫ້ບໍລິການທີ່ເປັນເຈົ້າຂອງສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ຄວາມສາມາດໃນການເຄື່ອນທີ່ຂອງພວກເຂົາ.ກົງກັນຂ້າມໃນຮູບພາບອະນຸພາກ CombiMag ຍັງອ່ອນລົງ, ແນະນໍາວ່າຂອງແຫຼວແລະອະນຸພາກອາດຈະມີຄວາມຫນາແຫນ້ນດຽວກັນແລະດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງບໍ່ສາມາດເຄື່ອນຍ້າຍໄປຫາກັນແລະກັນໄດ້ຢ່າງງ່າຍດາຍ.ອະນຸພາກຍັງສາມາດຕິດໄດ້ຖ້າແມ່ເຫຼັກເຄື່ອນທີ່ໄວເກີນໄປ, ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າຄວາມແຮງຂອງສະຫນາມແມ່ເຫຼັກບໍ່ສາມາດເອົາຊະນະຄວາມຫນາແຫນ້ນລະຫວ່າງອະນຸພາກໃນນ້ໍາໄດ້, ແນະນໍາວ່າຄວາມເຂັ້ມແຂງຂອງພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກແລະໄລຍະຫ່າງລະຫວ່າງແມ່ເຫຼັກແລະພື້ນທີ່ເປົ້າຫມາຍບໍ່ຄວນມາເປັນ. ແປກໃຈ.ສຳຄັນ.ຜົນໄດ້ຮັບເຫຼົ່ານີ້ຍັງຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າເຖິງແມ່ນວ່າແມ່ເຫຼັກສາມາດຈັບ microparticles ຈໍານວນຫຼາຍທີ່ໄຫຼຜ່ານພື້ນທີ່ເປົ້າຫມາຍ, ມັນເປັນໄປບໍ່ໄດ້ວ່າແມ່ເຫຼັກສາມາດອີງໃສ່ເພື່ອຍ້າຍອະນຸພາກ CombiMag ໄປຕາມຫນ້າດິນຂອງ trachea ໄດ້.ດັ່ງນັ້ນ, ພວກເຮົາໄດ້ສະຫຼຸບວ່າໃນການສຶກສາ vivo LV MF ຄວນໃຊ້ສະຫນາມແມ່ເຫຼັກຄົງທີ່ເພື່ອເປົ້າຫມາຍທາງຮ່າງກາຍຂອງພື້ນທີ່ສະເພາະຂອງຕົ້ນໄມ້ທາງອາກາດ.
ເມື່ອອະນຸພາກຖືກສົ່ງເຂົ້າໄປໃນຮ່າງກາຍ, ພວກມັນຍາກທີ່ຈະລະບຸໃນສະພາບການຂອງເນື້ອເຍື່ອເຄື່ອນທີ່ທີ່ສັບສົນຂອງຮ່າງກາຍ, ແຕ່ຄວາມສາມາດໃນການກວດພົບຂອງພວກມັນໄດ້ຖືກປັບປຸງໂດຍການຍ້າຍແມ່ເຫຼັກຕາມແນວນອນຜ່ານ trachea ເພື່ອ "wiggle" ສາຍ MP.ໃນຂະນະທີ່ການຖ່າຍຮູບໃນເວລາຈິງແມ່ນເປັນໄປໄດ້, ມັນງ່າຍທີ່ຈະແນມເບິ່ງການເຄື່ອນໄຫວຂອງອະນຸພາກຫຼັງຈາກສັດໄດ້ຖືກຂ້າຢ່າງມະນຸດສະທໍາ.ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ MP ປົກກະຕິແລ້ວແມ່ນສູງທີ່ສຸດໃນສະຖານທີ່ນີ້ໃນເວລາທີ່ແມ່ເຫຼັກຖືກຕັ້ງຢູ່ເທິງພື້ນທີ່ການຖ່າຍຮູບ, ເຖິງແມ່ນວ່າບາງອະນຸພາກມັກຈະຖືກພົບເຫັນຕື່ມອີກລົງໃນ trachea.ບໍ່ຄືກັບການສຶກສາໃນ vitro, ອະນຸພາກບໍ່ສາມາດຖືກດຶງລົງ trachea ໂດຍການເຄື່ອນໄຫວຂອງແມ່ເຫຼັກ.ການຄົ້ນພົບນີ້ແມ່ນສອດຄ່ອງກັບວິທີການຂອງເຍື່ອເມືອກທີ່ກວມເອົາພື້ນຜິວຂອງ trachea ໂດຍປົກກະຕິຈະປະມວນຜົນອະນຸພາກທີ່ຫາຍໃຈເຂົ້າ, ຈັບພວກມັນຢູ່ໃນຂີ້ມູກແລະຕໍ່ມາລ້າງມັນຜ່ານກົນໄກການເກັບກູ້ muco-ciliary.
ພວກເຮົາສົມມຸດວ່າການໃຊ້ແມ່ເຫຼັກຂ້າງເທິງແລະຂ້າງລຸ່ມຂອງ trachea ສໍາລັບການດຶງດູດ (ຮູບ 3b) ສາມາດສົ່ງຜົນໃຫ້ມີສະຫນາມແມ່ເຫຼັກທີ່ເປັນເອກະພາບ, ແທນທີ່ຈະເປັນພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສູງໃນຈຸດຫນຶ່ງ, ອາດຈະເຮັດໃຫ້ການແຜ່ກະຈາຍຂອງອະນຸພາກເປັນເອກະພາບຫຼາຍ..ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ການສຶກສາເບື້ອງຕົ້ນຂອງພວກເຮົາບໍ່ໄດ້ພົບເຫັນຫຼັກຖານທີ່ຊັດເຈນເພື່ອສະຫນັບສະຫນູນການສົມມຸດຕິຖານນີ້.ເຊັ່ນດຽວກັນ, ການຕັ້ງຄ່າຄູ່ແມ່ເຫຼັກເພື່ອ repulse (ຮູບ 3c) ບໍ່ໄດ້ສົ່ງຜົນໃຫ້ອະນຸພາກທີ່ຕັ້ງຢູ່ໃນພື້ນທີ່ຮູບພາບ.ການຄົ້ນພົບທັງສອງອັນນີ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການຕິດຕັ້ງແມ່ເຫຼັກຄູ່ບໍ່ໄດ້ປັບປຸງການຄວບຄຸມທ້ອງຖິ່ນຂອງຈຸດ MP ຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ, ແລະຜົນໄດ້ຮັບຂອງກໍາລັງແມ່ເຫຼັກທີ່ເຂັ້ມແຂງແມ່ນຍາກທີ່ຈະປັບ, ເຮັດໃຫ້ວິທີການນີ້ປະຕິບັດໄດ້ຫນ້ອຍລົງ.ເຊັ່ນດຽວກັນ, ການວາງທິດທາງຂອງແມ່ເຫຼັກຂ້າງເທິງແລະທົ່ວ trachea (ຮູບ 3d) ບໍ່ໄດ້ເພີ່ມຈໍານວນອະນຸພາກທີ່ຍັງເຫຼືອຢູ່ໃນພື້ນທີ່ຮູບພາບ.ບາງສ່ວນຂອງການຕັ້ງຄ່າທາງເລືອກເຫຼົ່ານີ້ອາດຈະບໍ່ປະສົບຜົນສໍາເລັດຍ້ອນວ່າພວກມັນເຮັດໃຫ້ມີການຫຼຸດຜ່ອນຄວາມແຮງຂອງສະຫນາມແມ່ເຫຼັກໃນເຂດ deposition.ດັ່ງນັ້ນ, ການຕັ້ງຄ່າແມ່ເຫຼັກດຽວຢູ່ທີ່ 30 ອົງສາ (ຮູບ 3a) ແມ່ນຖືວ່າງ່າຍດາຍທີ່ສຸດແລະມີປະສິດທິພາບທີ່ສຸດໃນວິທີການທົດສອບ vivo.
ການສຶກສາ LV-MP ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າໃນເວລາທີ່ vectors LV ຖືກລວມເຂົ້າກັບ CombiMag ແລະສົ່ງຫຼັງຈາກຖືກລົບກວນທາງດ້ານຮ່າງກາຍໃນທີ່ປະທັບຂອງສະຫນາມແມ່ເຫຼັກ, ລະດັບ transduction ເພີ່ມຂຶ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນ trachea ເມື່ອທຽບກັບການຄວບຄຸມ.ອີງໃສ່ການສຶກສາການຖ່າຍຮູບ synchrotron ແລະຜົນໄດ້ຮັບ LacZ, ພາກສະຫນາມແມ່ເຫຼັກເບິ່ງຄືວ່າສາມາດຮັກສາ LV ໃນ trachea ແລະຫຼຸດຜ່ອນຈໍານວນຂອງອະນຸພາກ vector ທີ່ທັນທີເຂົ້າໄປໃນເລິກເຂົ້າໄປໃນປອດ.ການປັບປຸງການກໍາຫນົດເປົ້າຫມາຍດັ່ງກ່າວສາມາດນໍາໄປສູ່ປະສິດທິພາບທີ່ສູງຂຶ້ນໃນຂະນະທີ່ການຫຼຸດຜ່ອນ titers ສົ່ງ, transduction ທີ່ບໍ່ແມ່ນເປົ້າຫມາຍ, ຜົນຂ້າງຄຽງອັກເສບແລະພູມຕ້ານທານ, ແລະຄ່າໃຊ້ຈ່າຍໃນການໂອນ gene.ສິ່ງສໍາຄັນ, ອີງຕາມຜູ້ຜະລິດ, CombiMag ສາມາດນໍາໃຊ້ໄດ້ປະສົມປະສານກັບວິທີການໂອນ gene ອື່ນໆ, ລວມທັງ vectors ໄວຣັສອື່ນໆ (ເຊັ່ນ: AAV) ແລະອາຊິດ nucleic.