ຂໍ​ຂອບ​ໃຈ​ທ່ານ​ສໍາ​ລັບ​ການ​ຢ້ຽມ​ຢາມ Nature.com​.ເວີຊັນຂອງຕົວທ່ອງເວັບທີ່ທ່ານກໍາລັງໃຊ້ມີການສະຫນັບສະຫນູນ CSS ຈໍາກັດ.ເພື່ອປະສົບການທີ່ດີທີ່ສຸດ, ພວກເຮົາແນະນຳໃຫ້ທ່ານໃຊ້ບຣາວເຊີທີ່ອັບເດດແລ້ວ (ຫຼືປິດການນຳໃຊ້ໂໝດຄວາມເຂົ້າກັນໄດ້ໃນ Internet Explorer).ໃນເວລານີ້, ເພື່ອຮັບປະກັນການສະຫນັບສະຫນູນຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງ, ພວກເຮົາຈະສະແດງເວັບໄຊທ໌ໂດຍບໍ່ມີຮູບແບບແລະ JavaScript.
Toxoplasma gondii ແມ່ນແມ່ກາຝາກ protozoan ພາຍໃນຈຸລັງທີ່ modulates microenvironment ຂອງເຈົ້າພາບທີ່ຕິດເຊື້ອແລະເປັນທີ່ຮູ້ກັນວ່າມີຄວາມກ່ຽວຂ້ອງກັບການເກີດຂອງການຂະຫຍາຍຕົວຂອງເນື້ອງອກໃນສະຫມອງ.ໃນການສຶກສານີ້, ພວກເຮົາສົມມຸດວ່າ exosomal miRNA-21 ຈາກການຕິດເຊື້ອ Toxoplasma ສົ່ງເສີມການຂະຫຍາຍຕົວຂອງເນື້ອງອກໃນສະຫມອງ.Exosomes ຈາກ Toxoplasma-infected BV2 microglia ແມ່ນມີລັກສະນະແລະການສ້າງຕັ້ງພາຍໃນຂອງຈຸລັງ glioma U87 ໄດ້ຖືກຢືນຢັນ.ໂປຣໄຟລ໌ການສະແດງອອກຂອງ exosomal microRNA ໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍໃຊ້ arrays ຂອງ microRNA ແລະ microRNA-21A-5p ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ Toxoplasma gondii ແລະການຈັດລຽງເນື້ອງອກ.ພວກເຮົາຍັງໄດ້ສືບສວນລະດັບ mRNA ຂອງ genes ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ tumor ໃນຈຸລັງ glioma U87 ໂດຍການປ່ຽນແປງລະດັບ miR-21 ໃນ ​​exosomes ແລະຜົນກະທົບຂອງ exosomes ຕໍ່ການຂະຫຍາຍຈຸລັງ glioma U87 ຂອງມະນຸດ.ໃນ exosomes ຂອງຈຸລັງ glioma U87 ທີ່ຕິດເຊື້ອ Toxoplasma gondii, ການສະແດງອອກຂອງ microRNA-21 ແມ່ນເພີ່ມຂຶ້ນແລະກິດຈະກໍາຂອງ genes antitumor (FoxO1, PTEN, ແລະ PDCD4) ຫຼຸດລົງ.exosomes ທີ່ມາຈາກ BV2 ທີ່ຕິດເຊື້ອ Toxoplasma ເຮັດໃຫ້ເກີດການຂະຫຍາຍຕົວຂອງຈຸລັງ glioma U87.Exosomes ກະຕຸ້ນການຂະຫຍາຍຕົວຂອງຈຸລັງ U87 ໃນຮູບແບບ tumor ຫນູ.ພວກເຮົາແນະນໍາວ່າການເພີ່ມຂຶ້ນຂອງ exosomal miR-21 ໃນ ​​microglia BV2 ທີ່ຕິດເຊື້ອ Toxoplasma ອາດຈະມີບົດບາດສໍາຄັນເປັນຕົວສົ່ງເສີມການຂະຫຍາຍຕົວຂອງເຊນໃນ U87 glioma cells ໂດຍການຫຼຸດລົງຂອງ gene antitumor.
ຄາດ​ຄະ​ເນ​ວ່າ​ມີ​ຫຼາຍ​ກວ່າ 18.1 ລ້ານ​ກໍລະນີ​ຂອງ​ພະຍາດ​ມະ​ເຮັງ​ຂັ້ນ​ສູງ​ໄດ້​ຮັບ​ການ​ວິນິດ​ໄສ​ໃນ​ທົ່ວ​ໂລກ​ໃນ​ປີ 2018, ໂດຍ​ມີ​ເນື້ອ​ງອກ​ຂອງ​ລະບົບ​ປະສາດ​ສ່ວນ​ກາງ​ປະມານ 297,000 ຄົນ​ຖືກ​ວິນິດ​ໄສ​ຕໍ່​ປີ (1.6% ຂອງ​ເນື້ອງອກ​ທັງ​ໝົດ)1.ການຄົ້ນຄວ້າທີ່ຜ່ານມາໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າປັດໃຈຄວາມສ່ຽງຕໍ່ການພັດທະນາເນື້ອງອກໃນສະຫມອງຂອງມະນຸດປະກອບມີຜະລິດຕະພັນເຄມີຕ່າງໆ, ປະຫວັດຄອບຄົວ, ແລະລັງສີ ionizing ຈາກຫົວແລະອຸປະກອນການວິນິດໄສ.ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ສາເຫດທີ່ແທ້ຈິງຂອງ malignancy ເຫຼົ່ານີ້ແມ່ນບໍ່ຮູ້ຈັກ.ປະມານ 20% ຂອງມະເຮັງທັງໝົດໃນທົ່ວໂລກແມ່ນເກີດຈາກເຊື້ອພະຍາດ, ລວມທັງໄວຣັສ, ເຊື້ອແບັກທີເຣັຍ ແລະແມ່ກາຝາກ3,4.ເຊື້ອພະຍາດຕິດຕໍ່ລົບກວນກົນໄກທາງພັນທຸກໍາຂອງເຊນເຈົ້າພາບ, ເຊັ່ນການສ້ອມແປງ DNA ແລະວົງຈອນຂອງເຊນ, ແລະສາມາດນໍາໄປສູ່ການອັກເສບຊໍາເຮື້ອແລະຄວາມເສຍຫາຍຕໍ່ລະບົບພູມຕ້ານທານ5.
ຕົວແທນການຕິດເຊື້ອທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບມະເຮັງຂອງມະນຸດແມ່ນເຊື້ອໄວຣັດທົ່ວໄປທີ່ສຸດ, ລວມທັງເຊື້ອໄວຣັສ papillomaviruses ຂອງມະນຸດແລະໄວຣັດຕັບອັກເສບ B ແລະ C.ແມ່ກາຝາກຍັງສາມາດມີບົດບາດທີ່ມີທ່າແຮງໃນການພັດທະນາມະເຮັງຂອງມະນຸດ.ພະຍາດແມ່ກາຝາກຫຼາຍຊະນິດ, ຄື Schistosoma, Opishorchis viverrini, O. felineus, Clonorchis sinensis ແລະ Hymenolepis nana, ໄດ້ຕິດພັນກັບມະເຮັງຊະນິດຕ່າງໆຂອງມະນຸດ 6,7,8.
Toxoplasma gondii ແມ່ນໂປຣໂຕໂຊນພາຍໃນເຊນທີ່ຄວບຄຸມສະພາບແວດລ້ອມຈຸນລະພາກຂອງເຊລເຈົ້າພາບທີ່ຕິດເຊື້ອ.ຄາດ​ຄະ​ເນ​ວ່າ​ແມ່​ກາ​ຝາກ​ນີ້​ຈະ​ຕິດ​ເຊື້ອ​ປະ​ມານ 30% ຂອງ​ປະ​ຊາ​ກອນ​ໂລກ, ເຮັດ​ໃຫ້​ປະ​ຊາ​ກອນ​ທັງ​ຫມົດ​ມີ​ຄວາມ​ສ່ຽງ 9,10.Toxoplasma gondii ສາມາດຕິດເຊື້ອອະໄວຍະວະທີ່ສໍາຄັນ, ລວມທັງລະບົບປະສາດສ່ວນກາງ (CNS), ແລະເຮັດໃຫ້ເກີດພະຍາດຮ້າຍແຮງເຊັ່ນ: ເຍື່ອຫຸ້ມສະຫມອງອັກເສບແລະ encephalitis, ໂດຍສະເພາະໃນຄົນເຈັບທີ່ມີພູມຕ້ານທານ9.ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, Toxoplasma gondii ຍັງສາມາດປ່ຽນແປງສະພາບແວດລ້ອມຂອງເຈົ້າພາບທີ່ຕິດເຊື້ອໂດຍການປັບຕົວການຂະຫຍາຍຕົວຂອງເຊນແລະການຕອບສະຫນອງຂອງພູມຕ້ານທານໃນບຸກຄົນທີ່ immunocompetent, ນໍາໄປສູ່ການຮັກສາການຕິດເຊື້ອຊໍາເຮື້ອ asymptomatic9,11.ຫນ້າສົນໃຈ, ເນື່ອງຈາກຄວາມກ່ຽວຂ້ອງກັນລະຫວ່າງ T. gondii ອັດຕາການແຜ່ກະຈາຍແລະການເກີດ tumor ໃນສະຫມອງ, ບົດລາຍງານຈໍານວນຫນຶ່ງຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າການປ່ຽນແປງສະພາບແວດລ້ອມໃນ vivo ເຈົ້າພາບເນື່ອງຈາກການຕິດເຊື້ອ T. gondii ຊໍາເຮື້ອຄ້າຍຄື tumor microenvironment.
Exosomes ເປັນທີ່ຮູ້ຈັກເປັນຕົວສື່ສານລະຫວ່າງຈຸລັງທີ່ສົ່ງເນື້ອຫາທາງຊີວະພາບ, ລວມທັງທາດໂປຼຕີນແລະອາຊິດນິວເຄຼຍ, ຈາກຈຸລັງໃກ້ຄຽງ16,17.Exosomes ສາມາດມີອິດທິພົນຕໍ່ຂະບວນການທາງຊີວະວິທະຍາທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ tumor ເຊັ່ນ: ການຕ້ານການ apoptosis, angiogenesis, ແລະ metastasis ໃນສະພາບແວດລ້ອມຈຸນລະພາກຂອງ tumor.ໂດຍສະເພາະ, miRNAs (miRNAs), RNAs ຂະຫນາດນ້ອຍທີ່ບໍ່ມີລະຫັດປະມານ 22 nucleotides ໃນຄວາມຍາວ, ເປັນຕົວຄວບຄຸມ gene post-transcriptional ທີ່ສໍາຄັນທີ່ຄວບຄຸມຫຼາຍກ່ວາ 30% ຂອງ mRNA ຂອງມະນຸດໂດຍຜ່ານ miRNA-induced silenced complex (miRISC).Toxoplasma gondii ສາມາດລົບກວນຂະບວນການທາງຊີວະພາບໂດຍການຄວບຄຸມການສະແດງອອກຂອງ miRNA ໃນເຈົ້າພາບທີ່ຕິດເຊື້ອ.ໂຮສ miRNAs ມີສັນຍານທີ່ສໍາຄັນສໍາລັບການຄວບຄຸມຂະບວນການຊີວະພາບຂອງເຈົ້າພາບເພື່ອບັນລຸຍຸດທະສາດການຢູ່ລອດຂອງແມ່ກາຝາກ.ດັ່ງນັ້ນ, ການສຶກສາການປ່ຽນແປງຂອງ host miRNA profile ເມື່ອຕິດເຊື້ອ T. gondii ສາມາດຊ່ວຍພວກເຮົາເຂົ້າໃຈການພົວພັນລະຫວ່າງ host ແລະ T. gondii ຫຼາຍຂຶ້ນ.ແທ້ຈິງແລ້ວ, Thirugnanam et al.15 ແນະນໍາວ່າ T. gondii ສົ່ງເສີມ carcinogenesis ສະຫມອງໂດຍການປ່ຽນແປງການສະແດງອອກຂອງຕົນກ່ຽວກັບ miRNAs ເຈົ້າພາບສະເພາະທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການຂະຫຍາຍຕົວ tumor ແລະພົບວ່າ T. gondii ສາມາດເຮັດໃຫ້ເກີດ gliomas ໃນສັດທົດລອງ.
ການສຶກສານີ້ສຸມໃສ່ການປ່ຽນແປງຂອງ exosomal miR-21 ໃນ ​​microglia ເຈົ້າພາບທີ່ຕິດເຊື້ອ Toxoplasma BV2.ພວກເຮົາໄດ້ສັງເກດເຫັນບົດບາດທີ່ເປັນໄປໄດ້ຂອງການປ່ຽນແປງ exosomal miR-21 ໃນການຂະຫຍາຍຕົວຂອງຈຸລັງ glioma U87 ເນື່ອງຈາກການເກັບຮັກສາໄວ້ໃນແກນຂອງ FoxO1/p27, ເຊິ່ງເປັນເປົ້າຫມາຍຂອງ miR-21 ຫຼາຍເກີນໄປ.
Exosomes ທີ່ມາຈາກ BV2 ແມ່ນໄດ້ຮັບໂດຍໃຊ້ centrifugation ທີ່ແຕກຕ່າງກັນແລະຖືກກວດສອບໂດຍວິທີການຕ່າງໆເພື່ອປ້ອງກັນການປົນເປື້ອນດ້ວຍອົງປະກອບຂອງຈຸລັງຫຼື vesicles ອື່ນໆ.SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) ສະແດງໃຫ້ເຫັນຮູບແບບທີ່ແຕກຕ່າງກັນລະຫວ່າງທາດໂປຼຕີນທີ່ສະກັດຈາກຈຸລັງ BV2 ແລະ exosomes (ຮູບ 1A), ແລະຕົວຢ່າງໄດ້ຖືກປະເມີນສໍາລັບການມີຂອງ Alix, ເຊິ່ງໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍຕາເວັນຕົກ blotting ຂອງເຄື່ອງຫມາຍທາດໂປຼຕີນຈາກ exosomal ໃນ .ການຕິດສະຫຼາກ Alix ໄດ້ຖືກພົບເຫັນຢູ່ໃນທາດໂປຼຕີນຈາກ exosome ແຕ່ບໍ່ແມ່ນຢູ່ໃນໂປຣຕີນ lysate ເຊນ BV2 (ຮູບ 1B).ນອກຈາກນັ້ນ, RNA ບໍລິສຸດຈາກ exosomes ທີ່ມາຈາກ BV2 ໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍໃຊ້ bioanalyzer.18S ແລະ 28S ribosomal subunits ບໍ່ຄ່ອຍສັງເກດເຫັນຢູ່ໃນຮູບແບບການເຄື່ອນຍ້າຍ RNA exosomal, ຊີ້ໃຫ້ເຫັນຄວາມບໍລິສຸດທີ່ເຊື່ອຖືໄດ້ (ຮູບ 1C).ສຸດທ້າຍ, ການສົ່ງຜ່ານກ້ອງຈຸລະທັດເອເລັກໂຕຣນິກໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ exosomes ທີ່ສັງເກດເຫັນມີຂະຫນາດປະມານ 60-150 nm ແລະມີໂຄງສ້າງຄ້າຍຄືຈອກປົກກະຕິຂອງ exosome morphology (ຮູບ 1D).
ຄຸນລັກສະນະຂອງ exosomes ທີ່ມາຈາກຈຸລັງ BV2.(A) ໜ້າເອກະສານຄວາມປອດໄພ.ທາດໂປຼຕີນໄດ້ຖືກແຍກອອກຈາກຈຸລັງ BV2 ຫຼື exosomes ທີ່ມາຈາກ BV2.ຮູບແບບຂອງທາດໂປຼຕີນແມ່ນແຕກຕ່າງກັນລະຫວ່າງຈຸລັງແລະ exosomes.(B) ການວິເຄາະ blot ຕາເວັນຕົກຂອງເຄື່ອງຫມາຍ exosomal (Alix).(C) ການປະເມີນຜົນຂອງ RNA ບໍລິສຸດຈາກຈຸລັງ BV2 ແລະ exosomes BV2 ທີ່ມາຈາກໂດຍໃຊ້ bioanalyzer.ດັ່ງນັ້ນ, 18S ແລະ 28S ribosomal subunits ໃນຈຸລັງ BV2 ບໍ່ຄ່ອຍພົບເຫັນຢູ່ໃນ exosomal RNA.(D) ການສົ່ງຜ່ານກ້ອງຈຸລະທັດອີເລັກໂທຣນິກໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ exosomes ທີ່ໂດດດ່ຽວຈາກຈຸລັງ BV2 ໄດ້ຖືກເປື້ອນດ້ວຍ uranyl acetate 2%.Exosomes ມີຂະຫນາດປະມານ 60-150 nm ແລະຮູບຊົງຈອກ (Song ແລະ Jung, ຂໍ້ມູນທີ່ບໍ່ໄດ້ເຜີຍແຜ່).
ການສ້າງຈຸລັງພາຍໃນຂອງ exosomes ທີ່ມາຈາກ BV2 ເຂົ້າໄປໃນຈຸລັງ glioma ຂອງມະນຸດ U87 ໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນໂດຍໃຊ້ກ້ອງຈຸລະທັດ confocal.exosomes ທີ່ມີປ້າຍຊື່ PKH26 ໄດ້ຖືກທ້ອງຖິ່ນຢູ່ໃນ cytoplasm ຂອງຈຸລັງ U87.Nuclei ຖືກ stained ດ້ວຍ DAPI (ຮູບ 2A), ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າ exosomes BV2 ທີ່ມາຈາກ BV2 ສາມາດພາຍໃນໂດຍຈຸລັງເຈົ້າພາບແລະມີອິດທິພົນຕໍ່ສະພາບແວດລ້ອມຂອງຈຸລັງຜູ້ຮັບ.
ການສ້າງພາຍໃນຂອງ exosomes ທີ່ມາຈາກ BV2 ເຂົ້າໄປໃນຈຸລັງ glioma U87 ແລະ exosomes ທີ່ມາຈາກ BV2 ທີ່ຕິດເຊື້ອ Toxoplasma RH ເຮັດໃຫ້ເກີດການແຜ່ຂະຫຍາຍຂອງຈຸລັງ glioma U87.(A) Exosomes engulfed ໂດຍຈຸລັງ U87 ວັດແທກໂດຍກ້ອງຈຸລະທັດ confocal.ຈຸລັງ glioma U87 ໄດ້ຖືກອົບດ້ວຍ exosomes ທີ່ມີປ້າຍຊື່ PKH26 (ສີແດງ) ຫຼືບໍ່ມີການຄວບຄຸມເປັນເວລາ 24 ຊົ່ວໂມງ.ນິວເຄລຍໄດ້ຖືກ stained ດ້ວຍ DAPI (ສີຟ້າ) ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນສັງເກດເຫັນພາຍໃຕ້ກ້ອງຈຸລະທັດ confocal (ແຖບຂະຫນາດ: 10 μm, x 3000).(B) ການຂະຫຍາຍຈຸລັງ glioma U87 ຖືກກໍານົດໂດຍການວິເຄາະການຂະຫຍາຍຈຸລັງ.ຈຸລັງ glioma U87 ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ exosomes ສໍາລັບເວລາທີ່ລະບຸໄວ້. *P < 0.05 ແມ່ນໄດ້ມາຈາກການທົດສອບ t ຂອງນັກຮຽນ. *P < 0.05 ແມ່ນໄດ້ມາຈາກການທົດສອບ t ຂອງນັກຮຽນ. *P < 0,05 получено по t-критерию Стьюдента. *P < 0.05 ໂດຍ t-test ຂອງນັກຮຽນ. *P < 0.05 通过学生t 检验获得 . *P < 0.05 * P< 0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P < 0.05 ໄດ້ຮັບໂດຍໃຊ້ t-test ຂອງນັກຮຽນ.
ຫຼັງຈາກການຢືນຢັນພາຍໃນຂອງ exosomes ທີ່ມາຈາກ BV2 ເຂົ້າໄປໃນຈຸລັງ glioma U87, ພວກເຮົາໄດ້ປະຕິບັດການຂະຫຍາຍຈຸລັງເພື່ອສືບສວນບົດບາດຂອງ exosomes ທີ່ມາຈາກ Toxoplasma BV2 ໃນການພັດທະນາຈຸລັງ glioma ຂອງມະນຸດ.ການປິ່ນປົວຈຸລັງ U87 ທີ່ມີ exosomes ຈາກຈຸລັງ BV2 ທີ່ຕິດເຊື້ອ T. gondii ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ exosomes ທີ່ຕິດເຊື້ອ BV2 ທີ່ຕິດເຊື້ອ T. gondii ເຮັດໃຫ້ເກີດການຂະຫຍາຍຕົວຂອງຈຸລັງ U87 ທີ່ສູງຂຶ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍເມື່ອທຽບກັບການຄວບຄຸມ (ຮູບ 2B).
ນອກຈາກນັ້ນ, ການຂະຫຍາຍຕົວຂອງຈຸລັງ U118 ໄດ້ຜົນດຽວກັນກັບ U87, ຍ້ອນວ່າ Toxoplasma ກະຕຸ້ນ exosomes ເຮັດໃຫ້ເກີດການຂະຫຍາຍຕົວສູງສຸດ (ຂໍ້ມູນບໍ່ໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນ).ອີງຕາມຂໍ້ມູນເຫຼົ່ານີ້, ພວກເຮົາສາມາດຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າ exosomes ທີ່ຕິດເຊື້ອ Toxoplasma ທີ່ມາຈາກ BV2 ມີບົດບາດສໍາຄັນໃນການຂະຫຍາຍຈຸລັງ glioma.
ເພື່ອສືບສວນຜົນກະທົບຂອງ exosomes ທີ່ມາຈາກ BV2 ທີ່ຕິດເຊື້ອ Toxoplasma ຕໍ່ກັບການພັດທະນາເນື້ອງອກ, ພວກເຮົາໄດ້ສັກຢາຈຸລັງ U87 glioma ເຂົ້າໄປໃນຫນູ nude ສໍາລັບຮູບແບບ xenograft ແລະການສັກຢາ exosomes BV2 ທີ່ມາຈາກ BV2 ຫຼື exosomes BV2 ທີ່ຕິດເຊື້ອ RH.ຫຼັງຈາກເນື້ອງອກປາກົດຂື້ນຫຼັງຈາກ 1 ອາທິດ, ແຕ່ລະກຸ່ມທົດລອງຂອງຫນູ 5 ໄດ້ຖືກແບ່ງອອກຕາມຂະຫນາດຂອງເນື້ອງອກເພື່ອກໍານົດຈຸດເລີ່ມຕົ້ນດຽວກັນ, ແລະຂະຫນາດເນື້ອງອກໄດ້ຖືກວັດແທກເປັນເວລາ 22 ມື້.
ໃນຫນູທີ່ມີຮູບແບບ xenograft U87, ຂະຫນາດຂອງເນື້ອງອກແລະນ້ໍາຫນັກທີ່ໃຫຍ່ກວ່າໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນຢູ່ໃນກຸ່ມ exosome ທີ່ຕິດເຊື້ອ RH ທີ່ມາຈາກ BV2 ໃນມື້ 22 (ຮູບ 3A,B).ໃນທາງກົງກັນຂ້າມ, ບໍ່ມີຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສໍາຄັນໃນຂະຫນາດເນື້ອງອກລະຫວ່າງກຸ່ມ exosome ທີ່ມາຈາກ BV2 ແລະກຸ່ມຄວບຄຸມຫຼັງຈາກການປິ່ນປົວ exosome.ນອກຈາກນັ້ນ, ຫນູທີ່ສັກຢາດ້ວຍຈຸລັງ glioma ແລະ exosomes ສະແດງໃຫ້ເຫັນເຖິງປະລິມານເນື້ອງອກທີ່ໃຫຍ່ທີ່ສຸດໃນກຸ່ມຂອງ exosomes BV2 ທີ່ຕິດເຊື້ອ RH (ຮູບ 3C).ຜົນໄດ້ຮັບເຫຼົ່ານີ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ exosomes ທີ່ຕິດເຊື້ອ Toxoplasma ທີ່ມາຈາກ BV2 ເຮັດໃຫ້ເກີດການຂະຫຍາຍຕົວຂອງ glioma ໃນຮູບແບບ tumor ຫນູ.
Oncogenesis (AC) ຂອງ exosomes ທີ່ມາຈາກ BV2 ໃນຕົວແບບຫນູ xenograft U87.ຂະໜາດເນື້ອງອກ (A) ແລະນ້ຳໜັກ (B) ແມ່ນເພີ່ມຂຶ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນໜູ BALB/c ເປືອຍກາຍທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ exosomes ທີ່ຕິດເຊື້ອ RH ທີ່ມາຈາກ BV2.ໜູ BALB/c ເປືອຍກາຍ (C) ຖືກສີດເຂົ້າໃຕ້ຜິວໜັງດ້ວຍເຊັລ 1 x 107 U87 ທີ່ຖືກໂຈະຢູ່ໃນສ່ວນປະສົມຂອງ Matrigel.ຫົກມື້ຫຼັງຈາກການສັກຢາ, 100 μgຂອງ exosomes ທີ່ມາຈາກ BV2 ໄດ້ຖືກປະຕິບັດໃນຫນູ.ຂະຫນາດເນື້ອງອກແລະນ້ໍາຫນັກໄດ້ຖືກວັດແທກໃນມື້ທີ່ລະບຸໄວ້ແລະຫຼັງຈາກການເສຍສະລະ, ຕາມລໍາດັບ. *P < 0.05. *P < 0.05. *Р < 0,05. *P < 0.05. *P < 0.05. *P < 0.05. *Р < 0,05. *P < 0.05.
ຂໍ້ມູນໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ 37 miRNAs (16 overexpressed ແລະ 21 downexpressed) ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບພູມຕ້ານທານຫຼືການພັດທະນາ tumor ແມ່ນມີການປ່ຽນແປງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນ microglia ຫຼັງຈາກການຕິດເຊື້ອ Toxoplasma RH strain (ຮູບ 4A).ລະດັບການສະແດງອອກຂອງ miR-21 ໃນບັນດາ miRNAs ທີ່ປ່ຽນແປງໄດ້ຖືກຢືນຢັນໂດຍ RT-PCR ໃນເວລາຈິງໃນ exosomes ທີ່ມາຈາກ BV2, exosomes ທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍຈຸລັງ BV2 ແລະ U87.ການສະແດງອອກຂອງ miR-21 ສະແດງໃຫ້ເຫັນການເພີ່ມຂື້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍຂອງ exosomes ຈາກຈຸລັງ BV2 ທີ່ຕິດເຊື້ອ Toxoplasma gondii (RH strain) (ຮູບ 4B).ລະດັບການສະແດງອອກຂອງ miR-21 ໃນຈຸລັງ BV2 ແລະ U87 ເພີ່ມຂຶ້ນຫຼັງຈາກການດູດຊຶມຂອງ exosomes ທີ່ປ່ຽນແປງ (ຮູບ 4B).ລະດັບທີ່ກ່ຽວຂ້ອງຂອງການສະແດງອອກ miR-21 ໃນເນື້ອເຍື່ອສະຫມອງຂອງຄົນເຈັບ tumor ແລະຫນູທີ່ຕິດເຊື້ອ Toxoplasma gondii (ME49 strain) ແມ່ນສູງກວ່າການຄວບຄຸມ, ຕາມລໍາດັບ (ຮູບ 4C).ຜົນໄດ້ຮັບເຫຼົ່ານີ້ກ່ຽວຂ້ອງກັບຄວາມແຕກຕ່າງລະຫວ່າງລະດັບການສະແດງອອກຂອງ microRNAs ທີ່ຄາດຄະເນແລະຢືນຢັນໃນ vitro ແລະ in vivo.
ການປ່ຽນແປງຂອງການສະແດງອອກຂອງ exosomal miP-21a-5p ໃນ microglia ທີ່ຕິດເຊື້ອ Toxoplasma gondii (RH).(A) ສະແດງໃຫ້ເຫັນການປ່ຽນແປງທີ່ສໍາຄັນໃນ siRNA ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບພູມຕ້ານທານຫຼືການພັດທະນາ tumor ຫຼັງຈາກການຕິດເຊື້ອ T. gondii RH.(B) ລະດັບການສະແດງອອກຂອງ miR-21 ທີ່ເປັນພີ່ນ້ອງກັນໄດ້ຖືກກວດພົບໂດຍ RT-PCR ໃນເວລາຈິງໃນ exosomes ທີ່ມາຈາກ BV2, exosomes ທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ BV2, ແລະຈຸລັງ U87.(C) ລະດັບການສະແດງອອກຂອງພີ່ນ້ອງ miR-21 ໄດ້ຖືກພົບເຫັນຢູ່ໃນເນື້ອເຍື່ອສະຫມອງຂອງຄົນເຈັບ tumor (N=3) ແລະຫນູທີ່ຕິດເຊື້ອ Toxoplasma gondii (ME49 strain) (N=3). *P < 0.05 ແມ່ນໄດ້ມາຈາກການທົດສອບ t ຂອງນັກຮຽນ. *P < 0.05 ແມ່ນໄດ້ມາຈາກການທົດສອບ t ຂອງນັກຮຽນ. *P< 0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. *P < 0.05 ໄດ້​ຮັບ​ໂດຍ​ການ​ນໍາ​ໃຊ້ t-test ຂອງ​ນັກ​ສຶກ​ສາ​. *P < 0.05 通过学生t 检验获得 . *P < 0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P < 0.05 ໄດ້ຮັບໂດຍໃຊ້ t-test ຂອງນັກຮຽນ.
Exosomes ຈາກຈຸລັງ BV2 ທີ່ຕິດເຊື້ອ RH ນໍາໄປສູ່ການຂະຫຍາຍຕົວຂອງ gliomas ໃນ vivo ແລະ in vitro (ຮູບ 2, 3).ເພື່ອກວດຫາ mRNA ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງ, ພວກເຮົາໄດ້ກວດເບິ່ງລະດັບ mRNA ຂອງ genes ເປົ້າຫມາຍ antitumor, forkhead box O1 (FoxO1), PTEN, ແລະການຕາຍຂອງເຊນທີ່ມີໂຄງການ 4 (PDCD4) ໃນຈຸລັງ U87 ທີ່ຕິດເຊື້ອ exosomes ທີ່ມາຈາກ BV2 ຫຼື RH BV2.ການວິເຄາະທາງຊີວະວິທະຍາໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າພັນທຸກໍາທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບເນື້ອງອກ, ລວມທັງພັນທຸກໍາຂອງ FoxO1, PTEN, ແລະ PDCD4, ມີສະຖານທີ່ຜູກມັດ miR-2121,22.ລະດັບ mRNA ຂອງ genes ເປົ້າຫມາຍ antitumor ໄດ້ຖືກຫຼຸດລົງໃນ exosomes BV2 ທີ່ຕິດເຊື້ອ RH ທຽບກັບ exosomes ທີ່ມາຈາກ BV2 (ຮູບ 5A).FoxO1 ສະແດງໃຫ້ເຫັນລະດັບທາດໂປຼຕີນທີ່ຫຼຸດລົງໃນ exosomes BV2 ທີ່ຕິດເຊື້ອ RH ທຽບກັບ exosomes ທີ່ມາຈາກ BV2 (ຮູບ 5B).ອີງຕາມຜົນໄດ້ຮັບເຫຼົ່ານີ້, ພວກເຮົາສາມາດຢືນຢັນວ່າ exosomes ທີ່ມາຈາກ RH-infected BV2 downregulate genes ຕ້ານ oncogenic, ຮັກສາບົດບາດຂອງເຂົາເຈົ້າໃນການຂະຫຍາຍຕົວ tumor.
exosomes ທີ່ຕິດເຊື້ອ BV2 ທີ່ຕິດເຊື້ອ Toxoplasma RH ເຮັດໃຫ້ເກີດການສະກັດກັ້ນ gene antitumor ໃນຈຸລັງ glioma U87 ໂດຍ exosomes BV2 ທີ່ຕິດເຊື້ອ Toxoplasma RH.(A) PCR ໃນເວລາທີ່ແທ້ຈິງຂອງ FoxO1, PTEN ແລະ PDCD4 ການສະແດງອອກໃນ exosomes ທີ່ມາຈາກ T. gondii RH-infected BV2 ເມື່ອທຽບກັບ PBS exosomes.β-actin mRNA ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນການຄວບຄຸມ.(B) ການສະແດງອອກຂອງ FoxO1 ຖືກກໍານົດໂດຍ blotting ຕາເວັນຕົກແລະຂໍ້ມູນ densitometry ໄດ້ຖືກປະເມີນທາງສະຖິຕິໂດຍໃຊ້ໂຄງການ ImageJ. *P < 0.05 ແມ່ນໄດ້ມາຈາກການທົດສອບ t ຂອງນັກຮຽນ. *P < 0.05 ແມ່ນໄດ້ມາຈາກການທົດສອບ t ຂອງນັກຮຽນ. *P< 0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. *P < 0.05 ໄດ້​ຮັບ​ໂດຍ​ການ​ນໍາ​ໃຊ້ t-test ຂອງ​ນັກ​ສຶກ​ສາ​. *P < 0.05 通过学生t 检验获得 . *P < 0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P < 0.05 ໄດ້ຮັບໂດຍໃຊ້ t-test ຂອງນັກຮຽນ.
ເພື່ອເຂົ້າໃຈຜົນກະທົບຂອງ miP-21 ໃນ ​​exosomes ກ່ຽວກັບລະບຽບການ gene ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ tumor, ຈຸລັງ U87 ໄດ້ຖືກຖ່າຍທອດດ້ວຍ inhibitor ຂອງ miP-21 ໂດຍໃຊ້ Lipofectamine 2000 ແລະຈຸລັງໄດ້ຖືກເກັບກ່ຽວ 24 ຊົ່ວໂມງຫຼັງຈາກການຖ່າຍທອດ.ລະດັບການສະແດງອອກຂອງ FoxO1 ແລະ p27 ໃນຈຸລັງທີ່ຖືກຖ່າຍທອດດ້ວຍສານຍັບຍັ້ງ miR-21 ໄດ້ຖືກປຽບທຽບກັບຈຸລັງທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ exosomes ທີ່ມາຈາກ BV2 ໂດຍໃຊ້ qRT-PCR (ຮູບ 6A,B).ການຖ່າຍທອດຕົວຍັບຍັ້ງ miR-21 ເຂົ້າໄປໃນຈຸລັງ U87 ເຮັດໃຫ້ການສະແດງອອກຂອງ FoxO1 ແລະ p27 ຫຼຸດລົງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ (ຮູບທີ 6).
RH-infected exosomal BV2-derived miP-21 ປ່ຽນແປງການສະແດງອອກ FoxO1/p27 ໃນຈຸລັງ glioma U87.ຈຸລັງ U87 ໄດ້ຖືກຖ່າຍທອດດ້ວຍສານຍັບຍັ້ງ miP-21 ໂດຍໃຊ້ Lipofectamine 2000 ແລະຈຸລັງໄດ້ຖືກເກັບກ່ຽວ 24 ຊົ່ວໂມງຫຼັງຈາກການຖ່າຍທອດ.ລະດັບການສະແດງອອກຂອງ FoxO1 ແລະ p27 ໃນຈຸລັງທີ່ຖືກຖ່າຍທອດດ້ວຍສານຍັບຍັ້ງ miR-21 ໄດ້ຖືກປຽບທຽບກັບລະດັບຂອງຈຸລັງທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ exosomes ທີ່ມາຈາກ BV2 ໂດຍໃຊ້ qRT-PCR (A, B).
ເພື່ອຫລົບຫນີການຕອບສະຫນອງຂອງພູມຕ້ານທານຂອງເຈົ້າພາບ, ແມ່ກາຝາກ Toxoplasma ປ່ຽນເປັນຈຸລັງເນື້ອເຍື່ອ.ພວກມັນ parasitize ເນື້ອເຍື່ອຕ່າງໆ, ລວມທັງສະຫມອງ, ຫົວໃຈ, ແລະກ້າມເນື້ອໂຄງກະດູກ, ຕະຫຼອດຊີວິດຂອງເຈົ້າພາບແລະ modulate ການຕອບສະຫນອງຂອງພູມຕ້ານທານຂອງເຈົ້າພາບ.ນອກຈາກນັ້ນ, ພວກເຂົາສາມາດຄວບຄຸມວົງຈອນຂອງເຊນແລະ apoptosis ຂອງຈຸລັງເຈົ້າພາບ, ສົ່ງເສີມການຂະຫຍາຍຕົວຂອງພວກເຂົາ14,24.Toxoplasma gondii ສ່ວນໃຫຍ່ຕິດເຊື້ອຈຸລັງ dendritic, neutrophils, ແລະເຊື້ອສາຍ monocyte/macrophage, ລວມທັງ microglia ຂອງສະຫມອງ.Toxoplasma gondii induces ຄວາມແຕກຕ່າງຂອງ macrophages ຂອງ phenotype M2, ຜົນກະທົບຕໍ່ການປິ່ນປົວບາດແຜຫຼັງຈາກການຕິດເຊື້ອຂອງເຊື້ອພະຍາດ, ແລະຍັງກ່ຽວຂ້ອງກັບ hypervascularization ແລະ fibrosis granulomatous.ພຶດຕິກຳການເກີດພະຍາດນີ້ຂອງການຕິດເຊື້ອ Toxoplasma ອາດຈະກ່ຽວຂ້ອງກັບເຄື່ອງຫມາຍທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການພັດທະນາເນື້ອງອກ.ສະພາບແວດລ້ອມທີ່ເປັນສັດຕູທີ່ຄວບຄຸມໂດຍ Toxoplasma ອາດຈະຄ້າຍຄືກັບມະເຮັງກ່ອນໄວອັນຄວນ.ດັ່ງນັ້ນ, ມັນສາມາດຄາດເດົາໄດ້ວ່າການຕິດເຊື້ອ Toxoplasma ຄວນປະກອບສ່ວນເຂົ້າໃນການພັດທະນາຂອງເນື້ອງອກຂອງສະຫມອງ.ໃນຄວາມເປັນຈິງ, ອັດຕາການຕິດເຊື້ອ Toxoplasma ສູງໄດ້ຖືກລາຍງານຢູ່ໃນເຊລັມຂອງຄົນເຈັບທີ່ມີເນື້ອງອກໃນສະຫມອງຕ່າງໆ.ນອກຈາກນັ້ນ, Toxoplasma gondii ອາດເປັນສານກໍ່ມະເຮັງອີກອັນໜຶ່ງ ແລະ ປະຕິບັດຢ່າງມີປະສິດຕິພາບເພື່ອຊ່ວຍໃຫ້ສານກໍ່ມະເຮັງທີ່ຕິດເຊື້ອອື່ນໆພັດທະນາເນື້ອງອກໃນສະໝອງ.ໃນເລື່ອງນີ້, ມັນເປັນມູນຄ່າທີ່ສັງເກດວ່າເຊື້ອໄວຣັສ P. falciparum ແລະ Epstein-Barr synergistically ປະກອບສ່ວນເຂົ້າໃນການສ້າງ lymphoma ຂອງ Burkitt.
ພາລະບົດບາດຂອງ exosomes ເປັນຜູ້ຄວບຄຸມໃນພາກສະຫນາມຂອງການຄົ້ນຄວ້າມະເຮັງໄດ້ຖືກສືບສວນຢ່າງກວ້າງຂວາງ.ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ບົດບາດຂອງ exosomes ລະຫວ່າງແມ່ກາຝາກແລະເຈົ້າພາບທີ່ຕິດເຊື້ອຍັງຄົງເຂົ້າໃຈບໍ່ດີ.ມາຮອດປະຈຸ, ຜູ້ຄວບຄຸມຕ່າງໆ, ລວມທັງທາດໂປຼຕີນທີ່ລັບ, ໄດ້ອະທິບາຍຂະບວນການທາງຊີວະພາບທີ່ແມ່ກາຝາກ protozoan ຕ້ານການໂຈມຕີຂອງເຈົ້າພາບແລະການຕິດເຊື້ອຕະຫຼອດໄປ.ບໍ່ດົນມານີ້, ມີແນວຄວາມຄິດທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນວ່າ microvesicles ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ protozoan ແລະ microRNAs ຂອງເຂົາເຈົ້າພົວພັນກັບຈຸລັງເຈົ້າພາບເພື່ອສ້າງສະພາບແວດລ້ອມທີ່ເອື້ອອໍານວຍສໍາລັບການຢູ່ລອດຂອງເຂົາເຈົ້າ.ດັ່ງນັ້ນ, ການສຶກສາເພີ່ມເຕີມແມ່ນຈໍາເປັນເພື່ອຄົ້ນພົບຄວາມສໍາພັນລະຫວ່າງ miRNAs exosomal ທີ່ປ່ຽນແປງແລະການຂະຫຍາຍຈຸລັງ glioma.ການປ່ຽນແປງຂອງ MicroRNA (ກຸ່ມພັນທຸ ກຳ miR-30c-1, miR-125b-2, miR-23b-27b-24-1 ແລະ miR-17-92) ຜູກມັດກັບຕົວສົ່ງເສີມ STAT3 ໃນ macrophages ຂອງມະນຸດທີ່ຕິດເຊື້ອ toxoplasma, ຖືກຄວບຄຸມແລະກະຕຸ້ນການຕ້ານທານ. -apoptosis ເພື່ອຕອບສະຫນອງຕໍ່ການຕິດເຊື້ອ Toxoplasma gondii 29 .ການຕິດເຊື້ອ Toxoplasma ເພີ່ມການສະແດງອອກຂອງ miR-17-5p ແລະ miR-106b-5p, ເຊິ່ງກ່ຽວຂ້ອງກັບພະຍາດ hyperproliferative ຫຼາຍ 30 .ຂໍ້ມູນເຫຼົ່ານີ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າ miRNAs ເຈົ້າພາບທີ່ຖືກຄວບຄຸມໂດຍການຕິດເຊື້ອ Toxoplasma ແມ່ນໂມເລກຸນທີ່ສໍາຄັນສໍາລັບການຢູ່ລອດຂອງແມ່ກາຝາກແລະການເກີດພະຍາດໃນພຶດຕິກໍາຊີວະພາບຂອງເຈົ້າພາບ.
ການປ່ຽນແປງ miRNAs ສາມາດມີອິດທິພົນຕໍ່ປະເພດຕ່າງໆຂອງພຶດຕິກໍາໃນລະຫວ່າງການເລີ່ມຕົ້ນແລະຄວາມຄືບຫນ້າຂອງຈຸລັງ malignant, ລວມທັງ gliomas: ຄວາມພຽງພໍຂອງຕົນເອງຂອງສັນຍານການຂະຫຍາຍຕົວ, insensitivity ກັບສັນຍານການຂະຫຍາຍຕົວ - ຍັບຍັ້ງ, apoptosis evasion, ທ່າແຮງ replicate ບໍ່ຈໍາກັດ, angiogenesis, invasion ແລະ metastasis, ແລະການອັກເສບ.ໃນ glioma, miRNAs ທີ່ປ່ຽນແປງໄດ້ຖືກລະບຸໄວ້ໃນການສຶກສາການສະແດງອອກຫຼາຍຮູບແບບ.
ໃນການສຶກສາໃນປະຈຸບັນ, ພວກເຮົາໄດ້ຢືນຢັນການສະແດງອອກຂອງ miRNA-21 ສູງໃນຈຸລັງເຈົ້າພາບທີ່ຕິດເຊື້ອ toxoplasma.miR-21 ໄດ້ຖືກລະບຸວ່າເປັນຫນຶ່ງໃນ microRNAs ທີ່ສະແດງອອກເລື້ອຍໆທີ່ສຸດໃນເນື້ອງອກແຂງ, ລວມທັງ gliomas, 33 ແລະການສະແດງອອກຂອງມັນກ່ຽວຂ້ອງກັບຊັ້ນຂອງ glioma.ຫຼັກຖານສະສົມຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າ miR-21 ແມ່ນ oncogene ນິຍາຍທີ່ເຮັດຫນ້າທີ່ເປັນປັດໃຈຕ້ານການ apoptotic ໃນການເຕີບໂຕຂອງ glioma ແລະຖືກສະແດງອອກຫຼາຍເກີນໄປໃນເນື້ອເຍື່ອແລະ plasma ຂອງໂຣກສະຫມອງຂອງມະນຸດ.ຫນ້າສົນໃຈ, ການ inactivation miR-21 ໃນຈຸລັງ glioma ແລະເນື້ອເຍື່ອເຮັດໃຫ້ເກີດການຍັບຍັ້ງການຂະຫຍາຍຈຸລັງເນື່ອງຈາກ apoptosis ຂຶ້ນກັບ caspase.ການວິເຄາະທາງຊີວະພາບຂອງເປົ້າໝາຍທີ່ຄາດຄະເນໄວ້ຂອງ miR-21 ໄດ້ເປີດເຜີຍ genes suppressor tumor ຫຼາຍອັນທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບເສັ້ນທາງ apoptosis, ລວມທັງການຕາຍຂອງເຊນທີ່ມີໂຄງການ 4 (PDCD4), tropomyosin (TPM1), PTEN, ແລະ forkhead box O1 (FoxO1), ທີ່ມີບ່ອນຜູກມັດ miR-2121..22.38.
FoxO1, ເປັນຫນຶ່ງໃນປັດໃຈການຖ່າຍທອດ (FoxO), ມີສ່ວນຮ່ວມໃນການພັດທະນາປະເພດຕ່າງໆຂອງມະເຮັງຂອງມະນຸດແລະສາມາດຄວບຄຸມການສະແດງອອກຂອງ tumor suppressor genes ເຊັ່ນ: p21, p27, Bim, ແລະ FasL40.FoxO1 ສາມາດຜູກມັດແລະກະຕຸ້ນການຍັບຍັ້ງວົງຈອນຂອງເຊນເຊັ່ນ p27 ເພື່ອສະກັດກັ້ນການຂະຫຍາຍຕົວຂອງເຊນ.ຍິ່ງໄປກວ່ານັ້ນ, FoxO1 ເປັນຕົວກະຕຸ້ນທີ່ສໍາຄັນຂອງສັນຍານ PI3K/Akt ແລະຄວບຄຸມຂະບວນການທາງຊີວະພາບຫຼາຍຢ່າງເຊັ່ນ: ການກ້າວຫນ້າຂອງວົງຈອນຂອງເຊນແລະຄວາມແຕກຕ່າງຂອງເຊນໂດຍຜ່ານການກະຕຸ້ນຂອງ p2742 transcription.
ສະຫຼຸບແລ້ວ, ພວກເຮົາເຊື່ອວ່າ exosomal miR-21 ທີ່ມາຈາກ microglia ທີ່ຕິດເຊື້ອ Toxoplasma ອາດຈະມີບົດບາດສໍາຄັນເປັນຕົວຄວບຄຸມການຂະຫຍາຍຕົວຂອງຈຸລັງ glioma (ຮູບ 7).ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ການສຶກສາເພີ່ມເຕີມແມ່ນຈໍາເປັນເພື່ອຊອກຫາການເຊື່ອມຕໍ່ໂດຍກົງລະຫວ່າງ exosomal miR-21, ການປ່ຽນແປງການຕິດເຊື້ອ Toxoplasma, ແລະການເຕີບໃຫຍ່ຂອງ glioma.ຜົນໄດ້ຮັບເຫຼົ່ານີ້ຄາດວ່າຈະເປັນຈຸດເລີ່ມຕົ້ນສໍາລັບການສຶກສາຄວາມສໍາພັນລະຫວ່າງການຕິດເຊື້ອ Toxoplasma ແລະການເກີດຂອງ glioma.
ແຜນວາດ schematic ຂອງກົນໄກຂອງ glioma (ສະຫມອງ) carcinogenesis ໄດ້ຖືກສະເຫນີໃນການສຶກສານີ້.ຜູ້ຂຽນແຕ້ມໃນ PowerPoint 2019 (Microsoft, Redmond, WA).
ໂປຣໂຕຄອນທົດລອງທັງໝົດໃນການສຶກສານີ້, ລວມທັງການໃຊ້ສັດ, ແມ່ນສອດຄ່ອງກັບມາດຕະຖານຂອງຄະນະກໍາມະການດູແລສັດ ແລະ ຜູ້ໃຊ້ຂອງມະຫາວິທະຍາໄລແຫ່ງຊາດເຊອຸນ ແລະໄດ້ຮັບການອະນຸມັດຈາກຄະນະກວດກາສະຖາບັນຂອງໂຮງຮຽນແພດສາດມະຫາວິທະຍາໄລແຫ່ງຊາດເຊອຸນ (ເລກ IRB SNU- 150715).-2).ຂັ້ນຕອນການທົດລອງທັງຫມົດໄດ້ຖືກປະຕິບັດໂດຍສອດຄ່ອງກັບຄໍາແນະນໍາຂອງ ARRIVE.
BV2 mouse microglia ແລະ U87 ຈຸລັງ glioma ຂອງມະນຸດໄດ້ຖືກປູກຝັງຢູ່ໃນຕົວກາງຂອງ Modified Eagle ຂອງ Dulbecco (DMEM; Welgene, Seoul, Korea) ແລະ Roswell Park Memorial Institute's Medium (RPMI; Welgene), ຕາມລໍາດັບ, ແຕ່ລະປະກອບດ້ວຍ serum bovine fetal 10%, 4 mM l- glutamine, 0.2 mM penicillin ແລະ 0.05 mM streptomycin.ຈຸລັງໄດ້ຖືກນໍາໄປລ້ຽງຢູ່ໃນບ່ອນອົບທີ່ມີ 5% CO2 ຢູ່ທີ່ 37 ° C.ເສັ້ນຈຸລັງ glioma ອີກອັນຫນຶ່ງ, U118, ຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການປຽບທຽບກັບຈຸລັງ U87.
ເພື່ອແຍກ exosomes ຈາກສາຍພັນ RH ທີ່ຕິດເຊື້ອ T. gondii ແລະ ME49, T. gondii tachyzoites (RH strain) ໄດ້ຖືກເກັບກ່ຽວຈາກຊ່ອງທ້ອງຂອງໜູ BALB/c ອາຍຸ 6 ອາທິດ ໂດຍສັກຢາກ່ອນ 3-4 ມື້.Tachyzoites ໄດ້ຖືກລ້າງສາມຄັ້ງດ້ວຍ PBS ແລະ purified ໂດຍ centrifugation ໃນ 40% Percoll (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)43.ເພື່ອໃຫ້ໄດ້ຮັບ tachyzoites ຂອງສາຍພັນ ME49, ໜູ BALB/c ໄດ້ຖືກສີດເຂົ້າທາງເນື້ອເຍື່ອດ້ວຍ 20 cysts ແລະການປ່ຽນແປງຂອງ tachyzoite ໃນ cysts ໄດ້ຖືກເກັບກໍາໂດຍການລ້າງຊ່ອງທ້ອງໃນວັນທີ 6-8 ຫຼັງຈາກການຕິດເຊື້ອ (PI).ໜູທີ່ຕິດເຊື້ອ PBS.ME49 tachyzoites ໄດ້ຖືກປູກຢູ່ໃນຈຸລັງທີ່ເສີມດ້ວຍ penicillin 100 μg/ml (Gibco/BRL, Grand Island, NY, USA), 100 μg/ml streptomycin (Gibco/BRL), ແລະ serum bovine fetal 5% (Lonza, Walkersville, MD) .., ສະ​ຫະ​ລັດ​ອາ​ເມລິ​ກາ​) ທີ່ 37 ° C ແລະ 5​% ກາກ​ບອນ dioxide​.ຫຼັງຈາກການປູກຝັງຢູ່ໃນຈຸລັງ Vero, ME49 tachyzoites ໄດ້ຖືກຖ່າຍທອດສອງຄັ້ງຜ່ານເຂັມ 25 gauge ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນຜ່ານການກັ່ນຕອງ 5 µm ເພື່ອເອົາສິ່ງເສດເຫຼືອແລະຈຸລັງ.ຫຼັງຈາກການລ້າງ, tachyzoites ໄດ້ຖືກຢຸດເຊົາໃນ PBS44.ຈຸລັງເນື້ອເຍື່ອຂອງ Toxoplasma gondii strain ME49 ໄດ້ຖືກຮັກສາໄວ້ໂດຍການສີດ cysts intraperitoneal ທີ່ແຍກອອກຈາກສະໝອງຂອງໜູ C57BL/6 ທີ່ຕິດເຊື້ອ (Orient Bio Animal Center, Seongnam, Korea).ສະໝອງຂອງໜູທີ່ຕິດເຊື້ອ ME49 ໄດ້ຖືກເກັບກ່ຽວຫຼັງຈາກ 3 ເດືອນຂອງ PI ແລະຖືກຕັດພາຍໃຕ້ກ້ອງຈຸລະທັດເພື່ອແຍກ cysts.ໜູທີ່ຕິດເຊື້ອໄດ້ຖືກເກັບຮັກສາໄວ້ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂພິເສດທີ່ບໍ່ມີເຊື້ອພະຍາດ (SPF) ຢູ່ໂຮງຮຽນແພດສາດມະຫາວິທະຍາໄລແຫ່ງຊາດກຸງໂຊລ.
RNA ທັງໝົດໄດ້ຖືກສະກັດມາຈາກ exosomes ທີ່ມາຈາກ BV2, ຈຸລັງ BV2 ແລະແພຈຸລັງໂດຍໃຊ້ miRNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany) ຕາມຄໍາແນະນໍາຂອງຜູ້ຜະລິດ, ລວມທັງເວລາ incubation ສໍາລັບຂັ້ນຕອນ elution.ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ RNA ໄດ້ຖືກກໍານົດຢູ່ໃນ NanoDrop 2000 spectrophotometer.ຄຸນນະພາບຂອງ RNA microarrays ໄດ້ຖືກປະເມີນໂດຍໃຊ້ Agilent 2100 bioanalyzer (Agilent Technologies, Amstelveen, ເນເທີແລນ).
DMEM ທີ່ມີ 10% exosome-poor FBS ໄດ້ຖືກກະກຽມໂດຍ ultracentrifugation ຢູ່ທີ່ 100,000g ສໍາລັບ 16 ຊົ່ວໂມງຢູ່ທີ່ 4 ° C ແລະການກັ່ນຕອງຜ່ານການກັ່ນຕອງ 0.22 µm (Nalgene, Rochester, NY, USA).ຈຸລັງ BV2, 5 × 105, ໄດ້ຖືກປູກຝັງຢູ່ໃນ DMEM ທີ່ປະກອບດ້ວຍ FBS 10% exosome-depleted FBS ແລະ 1% ຢາຕ້ານເຊື້ອທີ່ 37 ° C ແລະ 5% CO2.ຫຼັງຈາກ 24 ຊົ່ວໂມງຂອງການ incubation, tachyzoites ຂອງ strain RH ຫຼື ME49 (MOI = 10) ໄດ້ຖືກເພີ່ມເຂົ້າໄປໃນຈຸລັງແລະແມ່ກາຝາກທີ່ບໍ່ແມ່ນ invading ໄດ້ຖືກໂຍກຍ້າຍອອກພາຍໃນຫນຶ່ງຊົ່ວໂມງແລະເຕີມດ້ວຍ DMEM.Exosomes ຈາກຈຸລັງ BV2 ໄດ້ຖືກແຍກອອກໂດຍການແຍກຈຸດສູນກາງທີ່ມີການປ່ຽນແປງ, ວິທີການທີ່ໃຊ້ກັນຢ່າງກວ້າງຂວາງທີ່ສຸດ.ຢຸດເມັດ exosome ໃນ 300 µl PBS ສໍາລັບການວິເຄາະ RNA ຫຼືທາດໂປຼຕີນ.ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ exosomes ທີ່ໂດດດ່ຽວໄດ້ຖືກກໍານົດໂດຍໃຊ້ຊຸດທົດສອບທາດໂປຼຕີນຈາກ BCA (Pierce, Rockford, IL, USA) ແລະ NanoDrop 2000 spectrophotometer.
precipitates ຈາກ BV2 cells ຫຼື exosomes ທີ່ມາຈາກ BV2 ໄດ້ຖືກ lysed ໃນ PRO-PREP™ ທາດໂປຼຕີນຈາກການແກ້ໄຂການສະກັດເອົາ (iNtRon Biotechnology, Seongnam, ເກົາຫຼີ) ແລະທາດໂປຼຕີນໄດ້ຖືກ loaded ໃສ່ Coomassie brilliant blue stained 10% SDS polyacrylamide gels.ນອກຈາກນັ້ນ, ທາດໂປຼຕີນໄດ້ຖືກໂອນເຂົ້າໄປໃນເຍື່ອ PVDF ສໍາລັບ 2 ຊົ່ວໂມງ.blots ຕາເວັນຕົກໄດ້ຖືກກວດສອບໂດຍໃຊ້ Alix antibody (Cell Signaling Technology, Beverly, MA, USA) ເປັນເຄື່ອງໝາຍ exosomal.HRP-conjugated goat anti-mouse IgG (H + L) (Bethyl Laboratories, Montgomery, TX, USA) ແລະ LAS-1000 plus luminescent image analyzer (Fuji Photographic Film, Tokyo, Japan) ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນພູມຕ້ານທານຂັ້ນສອງ..ການສົ່ງຜ່ານກ້ອງຈຸລະທັດເອເລັກໂຕຣນິກໄດ້ຖືກປະຕິບັດເພື່ອສຶກສາຂະຫນາດແລະ morphology ຂອງ exosomes.Exosomes ທີ່ໂດດດ່ຽວຈາກເຊລ BV2 (6.40 µg/µl) ໄດ້ຖືກກະກຽມໃສ່ຕາຫນ່າງທີ່ເຄືອບຄາບອນ ແລະ ເປື້ອນດ້ວຍ uranyl acetate 2% ເປັນເວລາ 1 ນາທີ.ຕົວຢ່າງທີ່ກຽມໄວ້ໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນຢູ່ທີ່ແຮງດັນເລັ່ງ 80 kV ໂດຍໃຊ້ JEOL 1200-EX II (ໂຕກຽວ, ຍີ່ປຸ່ນ) ທີ່ມີກ້ອງຖ່າຍຮູບ ES1000W Erlangshen CCD (Gatan, Pleasanton, CA, USA).
exosomes ທີ່ມາຈາກ BV2 ໄດ້ຖືກ stained ໂດຍໃຊ້ PKH26 Red Fluorescent Linker Kit (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) ສໍາລັບ 15 ນາທີໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ.ຈຸລັງ U87, 2 × 105, ທີ່ມີ exosomes ທີ່ມີປ້າຍຊື່ PKH26 (ສີແດງ) ຫຼືບໍ່ມີ exosomes ເປັນການຄວບຄຸມທາງລົບ, ໄດ້ຖືກ incubated ຢູ່ທີ່ 37 ° C ສໍາລັບ 24 ຊົ່ວໂມງໃນ incubator 5% CO2.ນິວເຄລຍຂອງເຊນ U87 ຖືກຍ້ອມດ້ວຍ DAPI (ສີຟ້າ), ຈຸລັງ U87 ຖືກສ້ອມແຊມໃນ 4% paraformaldehyde ເປັນເວລາ 15 ນາທີຢູ່ທີ່ 4°C ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນວິເຄາະໃນລະບົບກ້ອງຈຸລະທັດຂອງ Leica TCS SP8 STED CW (Leica Microsystems, Mannheim, ເຢຍລະມັນ).ສັງເກດໄດ້.
cDNA ໄດ້ຖືກສັງເຄາະຈາກ siRNA ໂດຍໃຊ້ Mir-X siRNA ການສັງເຄາະສາຍທໍາອິດແລະຊຸດ SYBR qRT-PCR (Takara Bio Inc., Shiga, ຍີ່ປຸ່ນ).PCR ປະລິມານໃນເວລາທີ່ແທ້ຈິງໄດ້ຖືກປະຕິບັດໂດຍໃຊ້ລະບົບການກວດສອບ iQ5 ເວລາຈິງ PCR (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) ໂດຍໃຊ້ primers ແລະແມ່ແບບປະສົມກັບ SYBR Premix.DNA ໄດ້ຖືກຂະຫຍາຍອອກເປັນ 40 ຮອບຂອງການເສື່ອມຕົວຢູ່ທີ່ 95 ອົງສາເຊ ເປັນເວລາ 15 ວິນາທີ ແລະ ການເຊື່ອມທີ່ອຸນຫະພູມ 60 ອົງສາເຊເປັນເວລາ 60 ວິນາທີ.ຂໍ້ມູນຈາກແຕ່ລະປະຕິກິລິຍາ PCR ໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍໃຊ້ໂມດູນການວິເຄາະຂໍ້ມູນຂອງຊອບແວລະບົບ optical iQ™5 (Bio-Rad).ການປ່ຽນແປງທີ່ກ່ຽວຂ້ອງໃນການສະແດງອອກຂອງ gene ລະຫວ່າງ genes ເປົ້າຫມາຍທີ່ເລືອກແລະ β-actin / siRNA (ແລະ U6) ໄດ້ຖືກຄິດໄລ່ໂດຍໃຊ້ວິທີເສັ້ນໂຄ້ງມາດຕະຖານ.ລໍາດັບ primer ທີ່ໃຊ້ແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຕາຕະລາງ 1.
ຈຸລັງ glioma 3 x 104 U87 ໄດ້ຖືກແກ່ນໃນແຜ່ນ 96 ດີແລະປະສົມກັບ exosomes ທີ່ຕິດເຊື້ອ Toxoplasma ທີ່ມາຈາກ BV2 (50 μg / mL) ຫຼື exosomes nonpulse ໄດ້ມາຈາກ BV2 (50 μg / mL) ເປັນການຄວບຄຸມຢູ່ທີ່ 12, 18 ຊົ່ວໂມງແລະ 12, 18 ຊົ່ວໂມງ. .ອັດຕາການຂະຫຍາຍຕົວຂອງເຊນໄດ້ຖືກກໍານົດໂດຍໃຊ້ Cell Counting Kit-8 (Dojindo, Kumamoto, Japan) (ຕົວເລກເສີມ S1-S3) 46 .
ໜູເປືອຍກາຍ BALB/c ເພດຍິງ ອາຍຸ 5 ອາທິດ ໄດ້ຊື້ມາຈາກ Orient Bio (Seongnam-si, ເກົາຫຼີໃຕ້) ແລະ ເກັບຮັກສາໄວ້ໃນຄອກທີ່ເປັນໝັນໃນຫ້ອງ (22±2°C) ແລະຄວາມຊຸ່ມຊື່ນ (45±15°C).%) ຢູ່​ທີ່​ອຸນ​ຫະ​ພູມ​ຫ້ອງ (22±2°C​) ແລະ​ຄວາມ​ຊຸ່ມ​ຊື່ນ (45±15​%​)​.ຮອບວຽນແສງ 12 ຊົ່ວໂມງ ແລະ ຮອບວຽນມືດ 12 ຊົ່ວໂມງໄດ້ຖືກປະຕິບັດພາຍໃຕ້ SPF (Seoul National University School of Medicine Animal Center).ໜູໄດ້ຖືກແບ່ງອອກເປັນສາມກຸ່ມຂອງໜູ 5 ໂຕແບບສຸ່ມ ແລະ ທຸກກຸ່ມໄດ້ຖືກສັກເຂົ້າໃຕ້ຜິວໜັງດ້ວຍ PBS 400 ມລ ທີ່ມີຈຸລັງ glioma 1 x 107 U87 ແລະປັດໄຈການຂະຫຍາຍຕົວຫຼຸດລົງ BD Matrigel™ (BD Science, Miami, FL, USA).ຫົກມື້ຫຼັງຈາກການສັກຢາເນື້ອງອກ, 200 ມລກຂອງ exosomes ທີ່ມາຈາກຈຸລັງ BV2 (ມີ / ບໍ່ມີການຕິດເຊື້ອ Toxoplasma) ໄດ້ຖືກສັກເຂົ້າໄປໃນສະຖານທີ່ tumor.22 ມື້ຫຼັງຈາກການຕິດເຊື້ອ tumor, ຂະຫນາດ tumor ຂອງຫນູໃນແຕ່ລະກຸ່ມໄດ້ຖືກວັດແທກດ້ວຍ caliper ສາມຄັ້ງຕໍ່ອາທິດ, ແລະປະລິມານເນື້ອງອກໄດ້ຖືກຄິດໄລ່ໂດຍສູດ: 0.5 × (ກວ້າງ) × 2 × ຄວາມຍາວ.
ການວິເຄາະການສະແດງອອກຂອງ MicroRNA ໂດຍໃຊ້ miRCURYTM LNA miRNA array, ຮຸ່ນທີ 7 ມີ, mmu ແລະ rno arrays (EXIQON, Vedbaek, Denmark) ກວມເອົາ 1119 ຫນູທີ່ມີຄຸນສົມບັດດີໃນບັນດາ 3100 ມະນຸດ, ຫນູ ແລະຫນູ miRNA capture probes.ໃນລະຫວ່າງຂັ້ນຕອນນີ້, 250 ຫາ 1000 ng ຂອງ RNA ທັງຫມົດໄດ້ຖືກໂຍກຍ້າຍອອກຈາກ 5′-phosphate ໂດຍການປິ່ນປົວ calf intestinal phosphatase alkaline ປະຕິບັດຕາມໂດຍການຕິດສະຫຼາກດ້ວຍສີຍ້ອມ fluorescent ສີຂຽວ Hy3.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ຕົວຢ່າງທີ່ຕິດສະຫຼາກໄດ້ຖືກປະສົມໂດຍການໂຫຼດສະໄລ້ microarray ໂດຍໃຊ້ຊຸດຫ້ອງປະສົມປະສົມ (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) ແລະຊຸດສະໄລ້ປະສົມ (Agilent Technologies).ການປະສົມໄດ້ຖືກປະຕິບັດເປັນເວລາ 16 ຊົ່ວໂມງຢູ່ທີ່ 56 ° C, ຫຼັງຈາກນັ້ນ microarrays ໄດ້ຖືກລ້າງຕາມຄໍາແນະນໍາຂອງຜູ້ຜະລິດ.ຈາກນັ້ນສະໄລ້ໄມໂຄອາເລທີ່ປຸງແຕ່ງແລ້ວໄດ້ຖືກສະແກນໂດຍໃຊ້ລະບົບເຄື່ອງສະແກນໄມໂຄຣອາເຣ Agilent G2565CA (Agilent Technologies).ຮູບພາບທີ່ສະແກນໄດ້ຖືກນໍາເຂົ້າໂດຍໃຊ້ຊອບແວ Agilent Feature Extraction ເວີຊັ່ນ 10.7.3.1 (Agilent Technologies) ແລະຄວາມເຂັ້ມ fluorescence ຂອງແຕ່ລະຮູບໄດ້ຖືກຄິດໄລ່ໂດຍໃຊ້ໄຟລ໌ GAL ທີ່ສອດຄ້ອງກັນຂອງໂປຣໂຕຄໍ Exiqon ທີ່ຖືກດັດແກ້.ຂໍ້ມູນ Microarray ສໍາລັບການສຶກສາໃນປະຈຸບັນແມ່ນຖືກຝາກໄວ້ໃນຖານຂໍ້ມູນ GEO ພາຍໃຕ້ການເຂົ້າເປັນສະມາຊິກ GPL32397.
ໂປຣໄຟລ໌ການສະແດງອອກຂອງ miRNAs exosomal ແກ່ໃນ microglia ຂອງສາຍພັນ RH ຫຼື ME49 ທີ່ຕິດເຊື້ອ Toxoplasma ໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍໃຊ້ເຄື່ອງມືເຄືອຂ່າຍຕ່າງໆ.miRNAs ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການພັດທະນາ tumor ໄດ້ຖືກກໍານົດໂດຍໃຊ້ miRWalk2.0 (http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de) ແລະການກັ່ນຕອງອອກດ້ວຍຄວາມເຂັ້ມສັນຍານປົກກະຕິ (log2) ຫຼາຍກວ່າ 8.0.ໃນບັນດາ miRNAs, miRNAs ທີ່ສະແດງອອກແຕກຕ່າງກັນໄດ້ຖືກພົບເຫັນວ່າມີການປ່ຽນແປງຫຼາຍກ່ວາ 1.5 ເທົ່າໂດຍການວິເຄາະການກັ່ນຕອງຂອງ miRNAs ທີ່ປ່ຽນແປງໂດຍສາຍພັນ RH ຫຼື ME49 ທີ່ຕິດເຊື້ອ T. gondii.
ເຊລໄດ້ຖືກແກ່ນໃນແຜ່ນຫົກຂຸມ (3 x 105 ເຊນ/ດີ) ໃນ opti-MEM (Gibco, Carlsbad, CA, USA) ໂດຍໃຊ້ Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA).ຈຸລັງທີ່ຕິດເຊື້ອໄດ້ຖືກປູກຝັງເປັນເວລາ 6 ຊົ່ວໂມງແລະຫຼັງຈາກນັ້ນປ່ຽນເປັນຂະຫນາດກາງສົດ.ຈຸລັງໄດ້ຖືກເກັບກ່ຽວ 24 ຊົ່ວໂມງຫຼັງຈາກການຖ່າຍທອດ.
ການ​ວິ​ເຄາະ​ທາງ​ສະ​ຖິ​ຕິ​ໂດຍ​ສະ​ເພາະ​ແມ່ນ​ການ​ນໍາ​ໃຊ້ t-test ຂອງ​ນັກ​ສຶກ​ສາ​ກັບ​ຊອບ​ແວ Excel (Microsoft, Washington, DC, ອາ​ເມລິ​ກາ).ສໍາລັບການວິເຄາະສັດທົດລອງ, ANOVA ສອງທາງໄດ້ຖືກປະຕິບັດໂດຍໃຊ້ຊອບແວ Prism 3.0 (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA). P-values ​​< 0.05 ຖືວ່າມີຄວາມສຳຄັນທາງສະຖິຕິ. P-values ​​​​< 0.05 ຖືກ​ຖື​ວ່າ​ມີ​ຄວາມ​ໝາຍ​ທາງ​ສະຖິຕິ. Значения P <0,05 считались статистически значимыми. ຄ່າ P <0.05 ຖືກພິຈາລະນາເປັນຕົວເລກທີ່ສໍາຄັນທາງສະຖິຕິ. P 值< 0.05 被认为具有统计学意义. P 值< 0.05 Значения P <0,05 считались статистически значимыми. ຄ່າ P <0.05 ຖືກພິຈາລະນາເປັນຕົວເລກທີ່ສໍາຄັນທາງສະຖິຕິ.
ໂປຣໂຕຄອນທົດລອງທັງໝົດທີ່ໃຊ້ໃນການສຶກສາຄັ້ງນີ້ໄດ້ຮັບການອະນຸມັດຈາກຄະນະກວດກາສະຖາບັນຂອງໂຮງຮຽນແພດສາດມະຫາວິທະຍາໄລແຫ່ງຊາດເຊອຸນ (ໝາຍເລກ IRB SNU-150715-2).
The data used in this study are available upon reasonable request from the first author (BK Jung; mulddang@snu.ac.kr). And the microarray data for the current study is deposited in the GEO database under registration number GPL32397.
Furley, J. et al.ຄາດ​ຄະ​ເນ​ການ​ເກີດ​ມະ​ເຮັງ​ທົ່ວ​ໂລກ​ແລະ​ການ​ເສຍ​ຊີ​ວິດ​ໃນ​ປີ 2018​: ແຫຼ່ງ GLOBOCAN ແລະ​ວິ​ທີ​ການ​.ການຕີຄວາມໝາຍ.J. Ruck 144, 1941–1953 (2019).
Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS ຄວາມເຂົ້າໃຈກ່ຽວກັບປັດໃຈຄວາມສ່ຽງຂອງເນື້ອງອກໃນສະຫມອງແລະການແຊກແຊງການປິ່ນປົວຂອງພວກເຂົາ. Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS ຄວາມເຂົ້າໃຈກ່ຽວກັບປັດໃຈຄວາມສ່ຽງຂອງເນື້ອງອກໃນສະຫມອງແລະການແຊກແຊງການປິ່ນປົວຂອງພວກເຂົາ.Rashid, S., Rehman, K. ແລະ Akash, MS ການທົບທວນຄືນຂອງປັດໃຈຄວາມສ່ຽງຕໍ່ການເປັນເນື້ອງອກຂອງສະຫມອງແລະການແຊກແຊງການປິ່ນປົວທີ່ສໍາຄັນ. Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS 深入了解脑肿瘤的危险因素及其治疗干预措施. Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS ຄວາມເຂົ້າໃຈຢ່າງເລິກເຊິ່ງກ່ຽວກັບປັດໃຈຄວາມສ່ຽງຕໍ່ເນື້ອງອກຂອງສະຫມອງແລະການແຊກແຊງການປິ່ນປົວ.Rashid, S., Rehman, K. ແລະ Akash, MS ການທົບທວນຄືນຂອງປັດໃຈຄວາມສ່ຽງຕໍ່ການເປັນເນື້ອງອກຂອງສະຫມອງແລະການແຊກແຊງການປິ່ນປົວທີ່ສໍາຄັນ.ຊີວະວິທະຍາ.ຮ້ານຂາຍຢາ.143, 112119 (2021).
Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. ປະຕິສໍາພັນຂອງເຊື້ອແບັກທີເຣັຍ - ໄວຣັສໃນມະເຮັງລໍາໄສ້ຂອງມະນຸດແລະອະໄວຍະວະເພດຂອງເພດຍິງ: ສະຫຼຸບຂອງພະຍາດລະບາດແລະຫຼັກຖານໃນຫ້ອງທົດລອງ. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. ປະຕິສໍາພັນຂອງເຊື້ອແບັກທີເຣັຍ - ໄວຣັສໃນມະເຮັງລໍາໄສ້ຂອງມະນຸດແລະອະໄວຍະວະເພດຂອງເພດຍິງ: ສະຫຼຸບຂອງພະຍາດລະບາດແລະຫຼັກຖານໃນຫ້ອງທົດລອງ.Kato I., Zhang J. ແລະ Sun J. ປະຕິສໍາພັນຂອງເຊື້ອແບັກທີເຣັຍ - ໄວຣັສໃນມະເຮັງຂອງລໍາໄສ້ຂອງມະນຸດແລະອະໄວຍະວະເພດຍິງ: ສະຫຼຸບຂອງຂໍ້ມູນການລະບາດແລະຫ້ອງທົດລອງ. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. 人类口腔消化道癌和女性生殖道癌中的细菌-病毒相互作用：慍孻行中的细菌-病毒相互作用：慍孻行用。 Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. ປະຕິສໍາພັນຂອງເຊື້ອແບັກທີເຣັຍ - ໄວຣັດໃນການຍ່ອຍອາຫານໃນຊ່ອງປາກຂອງມະນຸດແລະລະບົບການຈະເລີນພັນຂອງເພດຍິງ: ສະຫຼຸບວິທະຍາສາດພະຍາດທີ່ນິຍົມແລະຫຼັກຖານຫ້ອງທົດລອງ.Kato I., Zhang J. ແລະ Sun J. ປະຕິສໍາພັນຂອງເຊື້ອແບັກທີເຣັຍ - ໄວຣັສໃນມະເຮັງລໍາໄສ້ຂອງມະນຸດແລະມະເຮັງອະໄວຍະວະເພດຍິງ: ສະຫຼຸບຂອງຂໍ້ມູນການລະບາດແລະຫ້ອງທົດລອງ.ມະເຮັງ 14, 425 (2022).
Magon, KL & Parish, JL ຈາກການຕິດເຊື້ອໄປສູ່ມະເຮັງ: ວິທີ DNA tumor viruses ປ່ຽນແປງການເປັນເຈົ້າພາບຂອງຈຸລັງສູນກາງຂອງຄາບອນແລະ lipid metabolism. Magon, KL & Parish, JL ຈາກການຕິດເຊື້ອໄປສູ່ມະເຮັງ: ວິທີ DNA tumor viruses ປ່ຽນແປງການເປັນເຈົ້າພາບຂອງຈຸລັງສູນກາງຂອງຄາບອນແລະ lipid metabolism.Mahon, KL ແລະ Parish, JL ການຕິດເຊື້ອໄຟໄຫມ້ກັບມະເຮັງ: ວິທີການໄວຣັສ tumor DNA ປ່ຽນແປງການເປັນເຈົ້າພາບຂອງຄາບອນສູນກາງແລະການເຜົາຜະຫລານ lipid. Magon, KL & Parish, JL 从感染到癌症：DNA肿瘤病毒如何改变宿主细胞的中心碳和脂质代谢. Magon, KL & Parish, JL ຈາກການຕິດເຊື້ອໄປສູ່ມະເຮັງ: ວິທີ DNA tumor viruses ປ່ຽນແປງການເປັນເຈົ້າພາບຂອງເຊນກາງຂອງຄາບອນແລະ lipid metabolism.Mahon, KL ແລະ Parish, JL ເຮັດໃຫ້ເກີດການຕິດເຊື້ອມະເຮັງ: ວິທີ DNA tumor viruses ປ່ຽນແປງການເຜົາຜະຫລານຂອງຄາບອນກາງແລະ lipid metabolism ໃນຈຸລັງເຈົ້າພາບ.ເປີດຊີວະສາດ.11, 210004 (2021).
Correia da Costa, JM et al.Catechol estrogens ຂອງ schistosomes ແລະພະຍາດຕັບອັກເສບແລະມະເຮັງທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ helminth.ດ້ານໜ້າ.ຮ້ອນພາຍໃນ.5, 444 (2014).