Giardia duodenum ແມ່ນຕົວກາຝາກທີ່ເຮັດໃຫ້ເກີດພະຍາດ giardiasis, ເປັນການຕິດເຊື້ອໃນລໍາໄສ້ໂດຍສະເພາະໃນເດັກນ້ອຍທີ່ມີອາການທາງຄລີນິກຂອງພະຍາດຖອກທ້ອງ.ພວກເຮົາໄດ້ລາຍງານກ່ອນຫນ້ານີ້ວ່າ extracellular G. duodenalis ກະຕຸ້ນການກະຕຸ້ນຂອງ intracellular oligomerization-like receptor 3 (NLRP3) binding nucleotides ແລະຄວບຄຸມການຕອບສະຫນອງອັກເສບຂອງເຈົ້າພາບໂດຍຜ່ານການ secretion extracellular vesicle (EV).ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ຮູບແບບໂມເລກຸນທີ່ແນ່ນອນຂອງ duodenococcal EV (GEV) ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບເຊື້ອພະຍາດທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບຂະບວນການນີ້ແລະບົດບາດຂອງ NLRP3 inflammasome ໃນ giardiasis ຍັງຄົງໄດ້ຮັບການອະທິບາຍ.
Recombinant eukaryotic expression plasmids pcDNA3.1(+)-alpha-2 ແລະ alpha-7.3 giardins ໃນ GEV ໄດ້ຖືກສ້າງຂຶ້ນ, ຖ່າຍທອດເຂົ້າໄປໃນ macrophages peritoneal ຕົ້ນຕໍຂອງຫນູ, ແລະກວດພົບໂດຍການວັດແທກການອັກເສບຂອງໂມເລກຸນ caspase-1.ລະດັບການສະແດງອອກ p20 ໄດ້ຖືກກວດສອບ..G. duodenalis alpha-2 ແລະ alpha-7.3 giardines ໄດ້ຖືກກໍານົດໃນເບື້ອງຕົ້ນໂດຍການວັດແທກ NLRP3 inflammasome (NLRP3, pro-interleukin-1 beta [IL-1β], pro-caspase-1 ແລະ caspase-1 p20), IL secretion.ລະດັບ 1β, apoptotic spotted protein (ASC) ລະດັບ oligomerization, ແລະ immunofluorescent localization ຂອງ NLRP3 ແລະ ASC.ບົດບາດຂອງ NLRP3 inflammasome ໃນການເຮັດໃຫ້ເກີດພະຍາດຂອງ G. duodenalis ໄດ້ຖືກປະເມີນໂດຍໃຊ້ຫນູທີ່ການກະຕຸ້ນ NLRP3 ໄດ້ຖືກສະກັດ (ຫນູທີ່ຖືກສະກັດ NLRP3) ແລະການປ່ຽນແປງທາງ pathological ຂອງນ້ໍາຫນັກຕົວ, ການໂຫຼດ parasitic duodenal, ແລະເນື້ອເຍື່ອ duodenal.ນອກຈາກນັ້ນ, ພວກເຮົາໄດ້ສືບສວນວ່າ hiardines alpha-2 ແລະ alpha-7.3 induce IL-1β secretion ໃນ vivo ຜ່ານ NLRP3 inflammasome ແລະກໍານົດບົດບາດຂອງໂມເລກຸນເຫຼົ່ານີ້ໃນການເຮັດໃຫ້ເກີດພະຍາດຂອງ G. duodenalis ໃນຫນູ.
Alpha-2 ແລະ alpha-7.3 giardines ກະຕຸ້ນການກະຕຸ້ນຂອງ NLRP3 inflammasome ໃນ vitro.ນີ້ນໍາໄປສູ່ການກະຕຸ້ນຂອງ p20 caspase-1, ການເພີ່ມຂຶ້ນຂອງລະດັບການສະແດງອອກຂອງ NLRP3, pro-IL-1β, ແລະໂປຣຕີນ pro-caspase-1, ການເພີ່ມຂື້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນຄວາມລັບຂອງ IL-1β, ການສ້າງຕັ້ງຂອງຈຸດ ASA ໃນ cytoplasm, ແລະ induction ຂອງ ASA oligomerization.ການອັກເສບ NLRP3 ການສູນເສຍຂອງອະໄວຍະວະເພດເຮັດໃຫ້ເຊື້ອພະຍາດຂອງ G. duodenalis ຮ້າຍແຮງຂຶ້ນ.ຫນູທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ cysts ໂດຍ gavage ຈາກຫນູທີ່ຖືກສະກັດ NLRP3 ສະແດງໃຫ້ເຫັນຈໍານວນ trophozoites ເພີ່ມຂຶ້ນແລະຄວາມເສຍຫາຍທີ່ຮ້າຍແຮງຕໍ່ duodenal villi, ມີລັກສະນະເປັນ crypts necrotic ມີການຫົດຕົວແລະງ່າ.ໃນການທົດລອງ vivo ໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ giardines alpha-2 ແລະ alpha-7.3 ສາມາດກະຕຸ້ນຄວາມລັບຂອງ IL-1β ຜ່ານ NLRP3 inflammasome, ແລະການສ້າງພູມຕ້ານທານກັບ giardines alpha-2 ແລະ alpha-7.3 ຫຼຸດຜ່ອນການເຮັດໃຫ້ເກີດພະຍາດຂອງ G. duodenalis ໃນຫນູ.
ປະຕິບັດຮ່ວມກັນ, ຜົນໄດ້ຮັບຂອງການສຶກສານີ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າ giardia alpha-2 ແລະ alpha-7.3 ເຮັດໃຫ້ເກີດການອັກເສບຂອງ host NLRP3 ແລະການຫຼຸດຜ່ອນການຕິດເຊື້ອຂອງ G. duodenalis ໃນຫນູ, ເຊິ່ງເປັນເປົ້າຫມາຍທີ່ດີໃນການປ້ອງກັນ giardiasis.
Giardia duodenum ເປັນແມ່ກາຝາກ protozoan extracellular ທີ່ອາໄສຢູ່ໃນລໍາໄສ້ນ້ອຍແລະເຮັດໃຫ້ 280 ລ້ານກໍລະນີຂອງ giardiasis ທີ່ມີອາການຖອກທ້ອງຕໍ່ປີ, ໂດຍສະເພາະໃນບັນດາເດັກນ້ອຍໃນປະເທດກໍາລັງພັດທະນາ [1].ປະຊາຊົນຕິດເຊື້ອໂດຍການດື່ມນ້ໍາຫຼືອາຫານທີ່ປົນເປື້ອນດ້ວຍ M. duodenum cysts, ຫຼັງຈາກນັ້ນເຂົ້າໄປໃນກະເພາະອາຫານແລະຖືກຂັບໄລ່ອອກໃນກະເພາະອາຫານ.Giardia duodenum trophozoites ຕິດກັບ epithelium duodenal, ເຮັດໃຫ້ເກີດອາການປວດຮາກ, ຮາກ, ຖອກທ້ອງ, ເຈັບທ້ອງ, ແລະການສູນເສຍນ້ໍາຫນັກ.ບຸກຄົນທີ່ມີພູມຕ້ານທານແລະໂຣກ fibrosis cystic ແມ່ນມີຄວາມອ່ອນໄຫວຕໍ່ການຕິດເຊື້ອ.ການຕິດເຊື້ອຍັງສາມາດເກີດຂຶ້ນໄດ້ໂດຍການຮ່ວມເພດທາງປາກ ແລະທາງຮູທະວານ [2].ຢາເຊັ່ນ: metronidazole, tinidazole, ແລະ nitazoxanide ແມ່ນທາງເລືອກການປິ່ນປົວທີ່ຕ້ອງການສໍາລັບການຕິດເຊື້ອ duodenal [3].ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ຢາເຄມີບໍາບັດເຫຼົ່ານີ້ເຮັດໃຫ້ເກີດຜົນຂ້າງຄຽງທີ່ບໍ່ດີເຊັ່ນ: ປວດຮາກ, ມະເຮັງ, ແລະ genotoxicity [4].ດັ່ງນັ້ນ, ຍຸດທະສາດທີ່ມີປະສິດທິພາບຫຼາຍຕ້ອງໄດ້ຮັບການພັດທະນາເພື່ອປ້ອງກັນການຕິດເຊື້ອ G. duodenalis.
Inflammasomes ແມ່ນຊັ້ນຂອງສະລັບສັບຊ້ອນທາດໂປຼຕີນຈາກ cytosolic ທີ່ເປັນສ່ວນຫນຶ່ງຂອງການຕອບສະຫນອງພູມຕ້ານທານພາຍໃນ, ຊ່ວຍປ້ອງກັນການຮຸກຮານຂອງເຊື້ອພະຍາດແລະການໄກ່ເກ່ຍການຕອບສະຫນອງອັກເສບ [5].ໃນບັນດາ inflammasomes ເຫຼົ່ານີ້, nucleotide-binding oligomerization (NOD) receptor 3 (NLRP3) nucleotide-binding oligomerization (NLRP3) nucleotide-binding-like inflammasomes ໄດ້ຖືກສຶກສາຢ່າງກວ້າງຂວາງເພາະວ່າມັນສາມາດກວດພົບໄດ້ໂດຍຮູບແບບໂມເລກຸນຂອງເຊື້ອພະຍາດ / ຄວາມເສຍຫາຍຕ່າງໆທີ່ກ່ຽວຂ້ອງ (PAMP / PAMP). DAMP), ຮັບຮູ້, ກະຕຸ້ນລະບົບພູມຕ້ານທານພາຍໃນ.ແລະຄວບຄຸມ homeostasis ລໍາໄສ້ໃນພະຍາດອັກເສບຫຼາຍ [6,7,8].ມັນປະກອບດ້ວຍຕົວຮັບການຮັບຮູ້ຮູບແບບ (PRR) NLRP3, ອະແດບເຕີ apoptotic spotted protein (ASC), ແລະ effector procaspase-1 ຫຼື procaspase-11.NLRP3 inflammasome ເຮັດຫນ້າທີ່ເປັນເຈົ້າພາບຕໍ່ຕ້ານການບຸກລຸກຂອງເຊື້ອພະຍາດ, ດັ່ງທີ່ສັງເກດເຫັນໃນ Neospora caninum [9], Paracoccidioides brasiliensis [10], ແລະການສຶກສາ Leishmania.[11], ແຕ່ມັນຍັງໄດ້ຮັບການລາຍງານວ່າການກະຕຸ້ນຂອງ NLRP3 inflammasome ຈໍາກັດການຕອບສະຫນອງຂອງພູມຕ້ານທານປ້ອງກັນແລະ exacerbates ຄວາມຄືບຫນ້າຂອງພະຍາດ, ຕົວຢ່າງ, ໃນແມ່ທ້ອງ [12].ອີງຕາມການຄົ້ນພົບທີ່ຜ່ານມາຂອງພວກເຮົາ, ພວກເຮົາໄດ້ລາຍງານວ່າ extracellular G. duodenalis ກະຕຸ້ນການກະຕຸ້ນ intracellular ຂອງການອັກເສບ NLRP3 ແລະ modulates host inflammatory responses by secreting extracellular vesicles (EVs) [13].ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ບົດບາດຂອງ NLRP3 inflammasome ໃນການຕິດເຊື້ອ G. duodenalis ໃນ vivo ຍັງຄົງຖືກກໍານົດ.
Giardins ໄດ້ຖືກອະທິບາຍໃນເບື້ອງຕົ້ນວ່າເປັນອົງປະກອບໂຄງສ້າງຂອງ G. duodenalis cytoskeleton ແລະມີບົດບາດສໍາຄັນໃນການເຄື່ອນໄຫວຂອງ trophozoite ແລະການຕິດພັນຂອງຈຸລັງ epithelial ໃນລໍາໄສ້ນ້ອຍ.ເພື່ອປັບຕົວເຂົ້າກັບສະພາບແວດລ້ອມໄດ້ດີຂຶ້ນແລະເພີ່ມເຊື້ອພະຍາດຂອງມັນ, G. duodenalis trophozoites ພັດທະນາໂຄງສ້າງ cytoskeletal ທີ່ເປັນເອກະລັກປະກອບດ້ວຍ 8 flagella, 1 ຮ່າງກາຍກາງ, ແລະ 1 ventral disc [14].trophozoites ຂອງ Giardia duodenum ໃຊ້ cytoskeleton ຂອງເຂົາເຈົ້າທີ່ຈະເຈາະເຂົ້າໄປໃນລໍາໄສ້ຂະຫນາດນ້ອຍເທິງ, ໂດຍສະເພາະແມ່ນ duodenum, ແລະຕິດກັບ enterocytes.ພວກເຂົາເຄື່ອນຍ້າຍຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງແລະຕິດກັບຈຸລັງ epithelial ໂດຍໃຊ້ metabolism ເຊນ.ດັ່ງນັ້ນ, ມີຄວາມໃກ້ຊິດລະຫວ່າງ cytoskeleton ແລະ virulence ຂອງພວກເຂົາ.Giardines ສະເພາະສໍາລັບ Giardia duodenum ແມ່ນອົງປະກອບຂອງໂຄງສ້າງ cytoskeleton [15] ແລະແບ່ງອອກເປັນສີ່ຊັ້ນ: α-, β-, γ-, ແລະ δ-giardines.ມີ 21 ສະມາຊິກຂອງຄອບຄົວ α-giardin, ທັງຫມົດທີ່ມີທາດການຊຽມຂຶ້ນກັບການຜູກມັດ phospholipids [16].ພວກເຂົາຍັງເຊື່ອມຕໍ່ cytoskeleton ກັບເຍື່ອເຊນ.ໃນບຸກຄົນທີ່ມີອາການຖອກທ້ອງທີ່ເກີດຈາກ G. duodenalis, α-giardins ແມ່ນສະແດງອອກສູງແລະມີພູມຕ້ານທານໃນລະຫວ່າງການຕິດເຊື້ອ [17].ວັກຊີນ heterologous ໂດຍອີງໃສ່ Giardia alfa-1 ປ້ອງກັນ giardiasis ໃນຫນູແລະເປັນ antigens ທີ່ມີທ່າແຮງສໍາລັບການພັດທະນາວັກຊີນ [18].Alpha-8 giardin, ທ້ອງຖິ່ນຢູ່ໃນເຍື່ອຫຸ້ມ plasma ແລະ flagella, ແຕ່ບໍ່ແມ່ນຢູ່ໃນແຜ່ນ ventral, ເສີມຂະຫຍາຍການເຄື່ອນໄຫວແລະອັດຕາການເຕີບໂຕຂອງ trophozoites ໃນ G. duodenalis [19].Alpha-14 giardin ຕິດກັບໂຄງສ້າງ microtubule ກ່ຽວກັບ flagella ແລະຜົນກະທົບຕໍ່ຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງ G. duodenalis [20].Alpha-11 giardine ແມ່ນມີຢູ່ໃນອຸດົມສົມບູນຕະຫຼອດວົງຈອນຊີວິດ, ແລະ overexpression ຂອງ alpha-11 giardine ທໍາລາຍ G. duodenalis ຕົວຂອງມັນເອງ [21].ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ມັນບໍ່ຊັດເຈນວ່າ alpha-2 giardine ແລະ alpha-7.3 giardine ແມ່ນປ້ອງກັນການຕິດເຊື້ອ G. duodenalis ແລະກົນໄກທີ່ຕິດພັນກັບພວກມັນ.
ໃນການສຶກສານີ້, recombinant eukaryotic expression plasmids pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine ແລະ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine ໄດ້ຖືກຖ່າຍທອດເຂົ້າໄປໃນ macrophages peritoneal ຕົ້ນຕໍຂອງຫນູເພື່ອກະຕຸ້ນເຈົ້າພາບ NLRP3.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ເປົ້າໝາຍອັກເສບແມ່ນໄດ້ຖືກກວດ.ພວກເຮົາຍັງໄດ້ປະເມີນບົດບາດຂອງ NLRP3 inflammasome ໃນເຊື້ອພະຍາດຂອງ G. duodenalis, ສືບສວນວ່າ alpha-2 ແລະ alpha-7,3 giardines ເຮັດໃຫ້ເກີດການກະຕຸ້ນຂອງ NLRP3 inflammasome ໃນ vivo, ແລະກໍານົດວ່າສອງບົດບາດນີ້ຂອງ giardines ໃນການເຮັດໃຫ້ເກີດພະຍາດ. G. duodenalis.ເປົ້າຫມາຍທົ່ວໄປຂອງພວກເຮົາແມ່ນເພື່ອພັດທະນາເປົ້າຫມາຍທີ່ໂດດເດັ່ນສໍາລັບການປ້ອງກັນການຕິດເຊື້ອ G. duodenalis.
ໜູຊະນິດປ່າ (WT) C57BL/6 ໜູເພດຍິງ ອາຍຸ 5-8 ອາທິດ ໄດ້ຊື້ຈາກສູນສັດທົດລອງ Liaoning Changsheng (Liaoning, ຈີນ).ໜູມີການເຂົ້າເຖິງນ້ຳໂດຍບໍ່ເສຍຄ່າ, ໄດ້ຮັບອາຫານທີ່ຂ້າເຊື້ອແລ້ວ ແລະຖືກເກັບຮັກສາໄວ້ໃນວົງຈອນແສງ/ມືດ 12/12 ຊົ່ວໂມງ.ກ່ອນທີ່ຈະຕິດເຊື້ອ, ຫນູໄດ້ຮັບຢາຕ້ານເຊື້ອ ad libitum ໃນນ້ໍາດື່ມເສີມດ້ວຍ ampicillin (1 mg/mL), vancomycin (1 mg/mL), ແລະ neomycin (1.4 mg/mL) (ທັງຫມົດທີ່ຊື້ຈາກ Shanghai, ຈີນ, ອົງການຈັດຕັ້ງທຽມ) [22. ].].ໜູທີ່ສູນເສຍຄວາມສາມາດໃນການກິນ ແລະ ດື່ມເປັນເວລາ > 24 ຊົ່ວໂມງ ແລະ ການສູນເສຍ ≥ 20% ນ້ຳໜັກຕົວແມ່ນໄດ້ຖືກຂ້າດ້ວຍມະນຸດໂດຍການເຄື່ອນທີ່ຂອງປາກມົດລູກ.
WB G. duodenalis trophozoites (American Type Culture Collection, Manassas, USA) ໄດ້ຮັບການເສີມດ້ວຍ serum bovine fetal 12.5% ​​(FBS; Every Green, Zhejiang, China) ແລະ 0.1% bovine bile (Sigma-Aldrich, St. Missouri, USA. ).ສະຫະລັດ) ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂ microaerobic.trophozoites confluent ໄດ້ຖືກເກັບກໍາກ່ຽວກັບກ້ອນແລະ passaged ໃນອັດຕາສ່ວນຂອງ 1: 4 ສໍາລັບການສືບພັນຕໍ່ໄປ.
cysts Giardia duodenum ໄດ້ຖືກກະຕຸ້ນຕາມທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ກ່ອນຫນ້ານີ້ [23], trophozoites ໄດ້ຖືກຂຸດຄົ້ນໃນໄລຍະ logarithmic ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນ diluted ດ້ວຍ encapsulation inducing medium, pH 7.1 (ດັດແກ້ TYI-S-33) ກັບຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນສຸດທ້າຍຂອງ 1 × 106 trophozoites / mL.ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງນໍ້າບີ 0.05% ປານກາງ).Trophozoites ໄດ້ຖືກປູກຝັງພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂ anaerobic ຢູ່ທີ່ 37 ° C ຈົນກ່ວາໄລຍະການຂະຫຍາຍຕົວຂອງ logarithmic.ປ່ຽນຕົວກາງເປັນ cyst inducing medium (pH 7.8; ດັດແປງ TYI-S-33 ທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງນ້ຳບີ 1%) ແລະ ວັດທະນະທຳ G. duodenalis ທີ່ອຸນຫະພູມ 37°C ເປັນເວລາ 48–96 ຊົ່ວໂມງ, ໃນໄລຍະນັ້ນ cysts ການສ້າງຕັ້ງໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນພາຍໃຕ້ກ້ອງຈຸລະທັດ.ຫຼັງຈາກ trophozoites ສ່ວນໃຫຍ່ໄດ້ຖືກກະຕຸ້ນໃຫ້ເກີດເປັນ cysts, ການປະສົມວັດທະນະທໍາໄດ້ຖືກເກັບກ່ຽວແລະ resuspended ໃນນ້ໍາ deionized ເປັນຫມັນເພື່ອ lyse trophozoites ທີ່ຍັງເຫຼືອ.cysts ໄດ້​ຖືກ​ນັບ​ແລະ​ເກັບ​ຮັກ​ສາ​ໄວ້​ທີ່ 4°C ສໍາ​ລັບ​ການ​ວິ​ເຄາະ​ຕໍ່​ມາ​ໂດຍ​ຜ່ານ​ທໍ່ gastric ໃນ​ຫນູ​.
Giardia extracellular vesicles (GEVs) ແມ່ນ enriched ດັ່ງທີ່ໄດ້ອະທິບາຍກ່ອນຫນ້ານີ້ [13].Trophozoites ໃນໄລຍະການເຕີບໂຕຂອງ logarithmic ໄດ້ຖືກຢຸດຄືນໃຫມ່ໃນຂະຫນາດກາງ TYI-S-33 ທີ່ຖືກດັດແປງໂດຍ FBS ທີ່ depleted exosome (ອຸດສາຫະກໍາຊີວະວິທະຍາ, Beit-Haemek, Israel) ກັບຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນສຸດທ້າຍຂອງ 1 × 106 parasites / mL ແລະ incubated ສໍາລັບ 12 ຊົ່ວໂມງ.ໄດ້​ຖືກ​ແຍກ​ອອກ​ຈາກ supernatant ວັດ​ທະ​ນະ​ທໍາ​ໂດຍ​ການ centrifugation ໃນ 2000 g ສໍາ​ລັບ 10 ນາ​ທີ, 10,000 g ສໍາ​ລັບ 45 ນາ​ທີ, ແລະ 100,000 g ສໍາ​ລັບ 60 ນາ​ທີ.Precipitates ໄດ້ຖືກລະລາຍໃນ phosphate buffered saline (PBS), ກໍານົດປະລິມານໂດຍໃຊ້ຊຸດທົດສອບທາດໂປຼຕີນຈາກ BCA (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) ແລະເກັບຮັກສາໄວ້ທີ່ -80 ° C. ຫຼືນໍາໃຊ້ໂດຍກົງສໍາລັບການວິເຄາະຕື່ມອີກ.
macrophages peritoneal ຫນູຕົ້ນຕໍໄດ້ຖືກກະກຽມຕາມທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ກ່ອນຫນ້ານີ້ [24].ໂດຍຫຍໍ້, ໜູ (ອາຍຸ 6-8 ອາທິດ) ໄດ້ຖືກສັກ (intraperitoneally [ip]) ດ້ວຍ 2.5 ml ຂອງ 2.98% Difco liquid thioglycol medium (BD, Franklin Lakes, NJ, USA) ແລະໃຫ້ອາຫານ 3-4 palates.A suspension ຂອງ macrophages ໄດ້ຖືກເກັບກໍາຈາກຊ່ອງທ້ອງຂອງຫນູຫຼັງຈາກ euthanasia ແລະ centrifuged 3 ເທື່ອໃນ 1000 g ສໍາລັບ 10 ນາທີ.ຈຸລັງທີ່ເກັບກ່ຽວໄດ້ຖືກກວດພົບໂດຍ flow cytometry ໂດຍໃຊ້ເຄື່ອງໝາຍ CD11b ຈົນກ່ວາຄວາມບໍລິສຸດຂອງເຊນແມ່ນ >98%, ຈາກນັ້ນຕື່ມໃສ່ແຜ່ນປູກຝັງ 6-well (4.5 x 106 cells/well) ແລະ incubated with 10% FBS (Bioindustry) at 37°C.ແລະ 5% CO2.
RNA ຖືກສະກັດຈາກ 1 × 107 trophozoites ໃນ 1 ml ຂອງ TRIzol reagent (Vazyme, Nanjing, ຈີນ), DNA genomic ໄດ້ຖືກສະກັດຈາກ G. duodenalis RNA ທັງຫມົດໂດຍໃຊ້ MonScript dsDNase (Monad, Wuhan, ຈີນ) ແລະ DNA ປະສົມ (cDNA) ໄດ້ຖືກສັງເຄາະ. ໃຊ້ MonScript RTIIII Super Mix (Monad) ຕາມຄໍາແນະນໍາຂອງຜູ້ຜະລິດ.
ຂໍ້ມູນລໍາດັບ CDS ສໍາລັບ gene G. duodenalis ເປົ້າຫມາຍແມ່ນໄດ້ຮັບຈາກ NCBI GenBank.ໃຊ້ Primer 5.0 ເພື່ອອອກແບບ primer cloning seamless ສະເພາະສໍາລັບແຕ່ລະ gene ເປົ້າຫມາຍ.primer ຕໍ່ຫນ້າ (5′-3′) ປະກອບດ້ວຍສາມສ່ວນ: ລໍາດັບຊ້ອນກັນທີ່ມີ vector linearized pcDNA3.1(+) EcoRV (TGGTGGAATTCTGCAGAT) ແລະເລີ່ມຕົ້ນ codons ATG ແລະ GNN (ຖ້າພື້ນຖານທໍາອິດບໍ່ແມ່ນ G).ນີ້ແມ່ນເຮັດເພື່ອປັບປຸງປະສິດທິພາບຂອງການສະແດງອອກ.ນອກຈາກນັ້ນ, ຢ່າງຫນ້ອຍ 16 bp ພື້ນຖານລວມ (ເນື້ອໃນ GC 40–60%/Tm ປະມານ 55 °C).primer ປີ້ນກັບກັນ (5′-3′) ປະກອບດ້ວຍສອງສ່ວນ, ລໍາດັບຊ້ອນກັນທີ່ມີ vector pcDNA3.1(+) EcoRV (+) (GCCGCCACTGTGCTGGAT) ແລະພື້ນຖານປະສົມປະສານຢ່າງຫນ້ອຍ 16 bp.(ບໍ່ລວມສອງຈຸດສຸດທ້າຍ).bases) codon ເຊັ່ນ AA ຫຼື GA ເພື່ອອະນຸຍາດໃຫ້ plasmids recombinant ສະແດງທາດໂປຼຕີນທີ່ຕິດສະຫຼາກຂອງເຂົາເຈົ້າ).ລໍາດັບ primer ແມ່ນໄດ້ລະບຸໄວ້ໃນຕາຕະລາງ 1 ແລະໄດ້ຖືກສັງເຄາະໂດຍ Kangmet Biotechnology Co., Ltd. (Changchun, ຈີນ).
ເປົ້າໝາຍໄດ້ຖືກຂະຫຍາຍອອກໂດຍໃຊ້ Pfu DNA polymerase (Tiangen, Beijing, China) ຫຼື Ex-taq (Takara Biomedical Technology [Beijing] Co., Ltd., Beijing, China) ໂດຍໃຊ້ G. duodenalis cDNA ທີ່ກຽມໄວ້ເປັນແມ່ແບບ.ການສະແດງອອກຂອງ eukaryotic vector plasmid pcDNA3.1(+) ຖືກຈັດເປັນເສັ້ນດ້ວຍເອນໄຊຈຳກັດ EcoRV ແລະ dephosphorylated ໂດຍໃຊ້ Fast AP (Thermo Fisher Scientific).ຊິ້ນສ່ວນ pcDNA3.1(+) Linearized ແລະຊິ້ນສ່ວນ gene ເປົ້າໝາຍທີ່ຂະຫຍາຍອອກໄດ້ຖືກຊຳລະໃຫ້ສະອາດໂດຍໃຊ້ຊຸດການຊຳລະລ້າງ DNA gel (Tiangen) ແລະ ວັດແທກປະລິມານໂດຍໃຊ້ Nanodrop ND-2000 (Thermo Fisher Scientific).ຊິ້ນສ່ວນ pcDNA3.1(+) ແລະແຕ່ລະຊິ້ນສ່ວນ gene ເປົ້າໝາຍໄດ້ຖືກລວມເຂົ້າກັນຄືນໃໝ່ໂດຍໃຊ້ MonClone single assembly cloning mix (Monad Biotech Co., Ltd., Suzhou, China) ແລະຢືນຢັນໂດຍການຈັດລໍາດັບ DNA ໂດຍໃຊ້ Comate Bioscience Company Limited (Changchun, ຈີນ)..
plasmids ທີ່ບໍ່ມີ endotoxin pcDNA3.1(+)-alpha-2 ແລະ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 ຖືກສ້າງຂຶ້ນໂດຍໃຊ້ SanPrep Endotoxin-free Plasmid Mini Kit (Sangon Biotech).ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນໄດ້ຖືກຮັກສາໄວ້ສູງກວ່າ 500 ng / µl ເພື່ອຮັບປະກັນວ່າ EDTA ໃນ elution buffer ບໍ່ໄດ້ແຊກແຊງກັບການວິເຄາະການຖ່າຍທອດ.macrophages peritoneal ຫນູຕົ້ນຕໍໄດ້ຖືກປູກຝັງຢູ່ໃນແຜ່ນ 6 ດີທີ່ມີ RPMI 1640 ຂະຫນາດກາງ (ອຸດສາຫະກໍາຊີວະພາບ) ສໍາລັບ 12 ຊົ່ວໂມງ, ຫຼັງຈາກນັ້ນຈຸລັງໄດ້ຖືກລ້າງ 3 ເທື່ອໃນ PBS ອົບອຸ່ນເພື່ອເອົາ penicillin ແລະ streptomycin, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນໃນຂະຫນາດກາງເສີມດ້ວຍຂະຫນາດກາງທີ່ສົມບູນ.plasmids ທີ່ບໍ່ມີ endotoxin pcDNA3.1(+)-alpha-2 ແລະ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 (2.5 μg) ຖືກເຈືອຈາງໃນ 125 μl ຂອງ Opti-MEM ຂະຫນາດກາງທີ່ຫຼຸດລົງ serum (Gibco, Thermo Fisher Scientific)..ຫຼັງຈາກນັ້ນ, 5 µl ຂອງ Lipofectamine 2000 transfection reagent (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific) ໄດ້ຖືກເຈືອຈາງໃນ 125 µl ຂອງຂະຫນາດກາງ Opti-MEM serum ຕ່ໍາ.ການກະກຽມສະລັບສັບຊ້ອນ liposome-DNA ໂດຍການປະສົມ plasmid ທີ່ບໍ່ມີ endotoxin ເຈືອຈາງກັບ Lipofectamine 2000 ແລະປ່ອຍໃຫ້ສ່ວນປະສົມຢືນຢູ່ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງເປັນເວລາ 5 ນາທີ.ໂອນສະລັບສັບຊ້ອນແຍກຕ່າງຫາກໄປຫາຈຸລັງໃນແຕ່ລະບ່ອນແລະປະສົມຄ່ອຍໆ.ຫຼັງຈາກ 4 ຊົ່ວໂມງ, ເມັດວັດທະນະທໍາຂອງເຊນໄດ້ຖືກທົດແທນດ້ວຍ 2 ມລຂອງຂະຫນາດກາງ RPMI 1640 ທີ່ສົມບູນແລະວັດທະນະທໍາໄດ້ຖືກສືບຕໍ່ເປັນເວລາ 24 ຊົ່ວໂມງ.ສື່ວັດທະນະທໍາເຊລສົດໄດ້ຖືກເພີ່ມເຂົ້າໃນຈຸລັງແລະ incubated ສໍາລັບຈຸດເວລາຕ່າງໆໂດຍອີງໃສ່ການອອກແບບການທົດສອບ.
ຕົວຢ່າງທາດໂປຼຕີນຈາກ supernatants ແລະ cell lysates ໄດ້ຖືກກະກຽມຕາມທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ກ່ອນຫນ້ານີ້ [25].ຕົວກໍານົດການການໂອນເຍື່ອສໍາລັບ pro-IL-1β, pro-caspase-1, caspase-1 p20, NLRP3, β-actin, ແລະ His-tag ແມ່ນ 200 mA/90 min.ສໍາລັບ interleukin 1β (IL-1β; R&D Systems, Minneapolis, Minnesota, USA), caspase-1 (p20) (Adipogen, Switzerland) ແລະ NLRP3 (Adipogen SA, Epalinges, Switzerland) ແລະ 1:5000 ກໍານົດເປົ້າຫມາຍຂອງແທັກຂອງລາວ ( Amylet Scientific, Wuhan, ຈີນ) ແລະ β-actin (Proteintech, Wuhan, ຈີນ).
ການເຊື່ອມໂຍງຂ້າມກັບ disuccinimide suberate (DSS) ໄດ້ຖືກປະຕິບັດຕາມທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ກ່ອນຫນ້ານີ້ [26].ເຊລຖືກລ້າງ 3 ເທື່ອດ້ວຍ PBS ເຢັນ ແລະ lysed ຢ່າງສົມບູນດ້ວຍເຂັມວັດແທກ 27 ໃນ 50 µl ປະຕິກິລິຍາ ASC buffer (pH 8.0) ປະກອບດ້ວຍ 25 mM Na2PO4, 187.5 mM NaCl, 25 mM HEPES ແລະ 125 mM NaHCO3.ການປະສົມໄດ້ຖືກຈຸດສູນກາງທີ່ 5000 g ສໍາລັບ 3 ນາທີແລະເມັດໄດ້ຖືກ sutured ດ້ວຍ 10 µl DSS (25 mM ໃນ DMSO) ແລະ 40 µl ປະຕິກິລິຍາ ASC buffer ສໍາລັບ 30 ນາທີຢູ່ທີ່ 37 ° C.ຫຼັງຈາກ centrifugation ຢູ່ທີ່ 5000 g ສໍາລັບ 10 ນາທີ, ເມັດໄດ້ຖືກລະລາຍໃນການແກ້ໄຂ 40 µl ຂອງ buffer ຕິກິຣິຍາ ASC ແລະ 10 µl ຂອງ 6x ທາດໂປຼຕີນ buffer loading (TransGen, ປັກກິ່ງ, ຈີນ), ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນການແກ້ໄຂໄດ້ຖືກ quenched ໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງສໍາລັບ 15. ນາທີ, ຫຼັງຈາກນັ້ນຕົ້ມ 10 ນາທີ.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ຕົວຢ່າງທາດໂປຼຕີນແມ່ນໄດ້ຮັບການ blotting ຕາເວັນຕົກໂດຍໃຊ້ anti-ASC ພູມຕ້ານທານຕົ້ນຕໍ (Wanleibio, Shenyang, ຈີນ) ໃນອັດຕາສ່ວນການເຈືອຈາງຂອງ 1: 500.
ປະຕິບັດຕາມຂັ້ນຕອນທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ກ່ອນຫນ້ານີ້ [13], supernatants ວັດທະນະທໍາເຊນໄດ້ຖືກຂຸດຄົ້ນແລະການ secretion ຂອງ pro-inflammatory cytokine IL-1βຖືກກໍານົດໂດຍໃຊ້ mouse IL-1 Beta ELISA kit (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific).ປ່ຽນຄ່າ OD450nm ໄປສູ່ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງທາດໂປຼຕີນໂດຍໃຊ້ເສັ້ນໂຄ້ງມາດຕະຖານ IL-1β.
ຈຸລັງທີ່ເຄືອບເທິງຝາປິດໄດ້ຖືກລ້າງຄ່ອຍໆ 3 ເທື່ອໃນ PBS ທີ່ອົບອຸ່ນ, ສ້ອມແຊມໃນຈຸລັງຈຸລັງ (Biosharp, ປັກກິ່ງ, ຈີນ) ສໍາລັບ 10 ນາທີໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ (RT), ໃນ 0.1% Triton X-Permeabilize ທີ່ 100 (ເຈືອຈາງໃນ PBS; Biosharp ) ສໍາລັບ 20 ນາທີໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງແລະຕັນໃນ 5% bovine serum albumin (ໃນ PBS) ສໍາລັບ 2 ຊົ່ວໂມງໃນອຸນຫະພູມຫ້ອງ.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ຈຸລັງໄດ້ຖືກ incubated ຄືນຄືນຢູ່ທີ່ 4 ° C ດ້ວຍພູມຕ້ານທານຕົ້ນຕໍຕໍ່ຕ້ານ ASC (1: 100 dilution) ຫຼື NLRP3 (1:100 dilution), ຕາມລໍາດັບ, ແລະ Cy3 ຕິດປ້າຍແບ້ຕ້ານ rabbit IgG (H + L) (1: 400; EarthOx. , San Francisco, CA, USA) ຫຼື FITC-conjugated goat anti-mouse IgG (1:400; Earthox) ຄືນຢູ່ທີ່ 37°C ໃນບ່ອນມືດເປັນເວລາ 1 ຊົ່ວໂມງ.ນິວເຄລຍໄດ້ຖືກສີດດ້ວຍ Hoechst 33258 (10 μg/ml; UE, Suzhou, China) ເປັນເວລາ 5 ນາທີແລະສັງເກດເຫັນພາຍໃຕ້ກ້ອງຈຸລະທັດ fluorescence (Olympus Corporation, Tokyo, Japan).
ຫນູຖືກແບ່ງອອກເປັນສີ່ກຸ່ມ (n = 7 ໃນແຕ່ລະກຸ່ມ): (i) ກຸ່ມຄວບຄຸມທາງລົບທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວ PBS (PBS ເທົ່ານັ້ນ; gavage 100 µl/mouse PBS ຕິດຕາມດ້ວຍການສັກຢາ intraperitoneal ປະຈໍາວັນ 100 µl/mouse PBS 3 ຊົ່ວໂມງຕໍ່ມາ)., ຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງເປັນເວລາ 7 ວັນ);(ii) ກຸ່ມຄວບຄຸມທາງລົບທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍຢາຍັບຍັ້ງ MCC950 [27] (100 µl / ຫນູຜ່ານ gavage PBS, 3 ຊົ່ວໂມງຕໍ່ມາ, 10 mg / kg ນ້ໍາຫນັກຕົວ [BW] MCC950 [ໃນ PBS] ໄດ້ຖືກປະຕິບັດ intraperitoneally ປະຈໍາວັນ, ໄລຍະເວລາ 7 ມື້);(iii) G. duodenalis cyst infection group (1.5 x 106 cysts/mouse by gavage, 3 ຊົ່ວໂມງຕໍ່ມາ, 100 μl/mouse PBS intraperitoneally administered daily for 7 days);(iv) G. duodenalis cyst ກຸ່ມການຕິດເຊື້ອຮ່ວມ MCC950 inhibitor ກຸ່ມການປິ່ນປົວ (1.5×106 cysts/ຫນູຜ່ານ gavage, 10mg/kg ນ້ໍາຫນັກຕົວ MCC950 intraperitoneally ປະຈໍາວັນສໍາລັບ 7 ມື້ຢູ່ 3h).ນ້ຳໜັກຕົວຂອງໜູແຕ່ລະໂຕໄດ້ຖືກຕິດຕາມປະຈຳວັນ ແລະ ໜູທັງໝົດຖືກກວດຄືນໃນວັນທີ 7.duodenum ທີ່ເກັບກ່ຽວ (ຍາວ 3 ຊຕມ) ຖືກຕັດເປັນຕ່ອນນ້ອຍໆໃນ 1 ມລ PBS, cysts ໄດ້ຖືກທໍາລາຍຄືນໃນ PBS ຢູ່ທີ່ 4 ° C, ແລະ G. duodenalis trophozoites.duodenum ສົດ (ຍາວ 1 ຊຕມ) ຖືກແຍກສໍາລັບການຍ້ອມສີ hematoxylin ແລະ eosin (H&E).
ຫນູໄດ້ຖືກແບ່ງອອກເປັນສອງກຸ່ມ: (i) ກຸ່ມຄວບຄຸມ MOCK ແລະ (ii) ກຸ່ມ inhibitor MCC950.ມີຫ້າການປິ່ນປົວໃນແຕ່ລະກຸ່ມ (n = 7/ກຸ່ມການປິ່ນປົວ): (i) ການປິ່ນປົວ PBS ກຸ່ມຄວບຄຸມທາງລົບ (PBS ເທົ່ານັ້ນ; 100 µl/mouse PBS, ການສັກຢາ intramuscular (IM) (tibialis anterior) [28, 29] ;( ii) pcDNA3.1(+) ກຸ່ມຄວບຄຸມທາງລົບ plasmid (100 µg/DNA ຂອງຫນູ, ຜ່ານການສັກຢາເຂົ້າກ້າມ); ກຸ່ມທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ plasmid pcDNA3.1(+)-alpha-2 (100 μg/DNA ຂອງຫນູ, ໂດຍການສັກຢາເຂົ້າກ້າມ), ແລະ (v) ກຸ່ມທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ plasmid pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 (100 µg/mouse. DNA, ຫຼັງຈາກ 12 ຊົ່ວໂມງຂອງ passage, ຫນູໃນກຸ່ມ inhibitor MCC950 ໄດ້ຮັບການສັກຢາ intraperitoneal ປະຈໍາວັນຂອງ MCC950 (10 mg / kg ນ້ໍາຫນັກຕົວ) ສໍາລັບ 7 ມື້, ໃນຂະນະທີ່ຫນູໃນກຸ່ມ MOCK ໄດ້ຮັບປະລິມານການປິ່ນປົວ PBS ເທົ່າທຽມກັນ. ຕົວຢ່າງເລືອດແມ່ນ. ເກັບກໍາຂໍ້ມູນຈາກຫນູໃນຕາແລະປະໄວ້ຄ້າງຄືນຢູ່ທີ່ 4 ° C ຕົວຢ່າງເຊລັມໄດ້ຖືກແຍກອອກໂດຍໃຊ້ enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) ແລະວັດແທກລະດັບ IL-1β.
ໜູສາມສິບຫ້າຄົນຖືກແບ່ງອອກເປັນຫ້າກຸ່ມ (n=7/ກຸ່ມ).ກຸ່ມ 1 ແມ່ນກຸ່ມຄວບຄຸມທາງລົບທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ PBS: ຫນູໄດ້ຮັບ 100 μlຂອງ PBS intramuscularly ແລະ 3 ມື້ຕໍ່ມາໂດຍ gavage.ກຸ່ມທີ 2 ແມ່ນກຸ່ມຄວບຄຸມທາງບວກທີ່ຕິດເຊື້ອ G. duodenalis cysts: ໜູໄດ້ຖືກສັກຢາ PBS 100 μl, ແລະ 3 ມື້ຕໍ່ມາ 1.5 x 106 cysts/ mouse ໄດ້ຖືກສັກຢາ intragastrically.ກຸ່ມທີສາມ – ການສ້າງພູມຄຸ້ມກັນ plasmid ດ້ວຍ pcDNA3.1(+) ປະສົມປະສານກັບກຸ່ມຄວບຄຸມສໍາລັບການຕິດເຊື້ອ duodenal cyst: ຫນູໄດ້ຮັບ 100 μgຂອງ plasmid DNA pcDNA3.1(+)(im) ທາງປາກ, 1.5 × 106 cysts / ຫນູ 3 ສໍາລັບຫຼາຍໆຄັ້ງ. ມື້.ກຸ່ມ 4 ແລະ 5 ແມ່ນການປະສົມ pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine plasmid ຫຼື pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine plasmid ປະສົມປະສານກັບການຕິດເຊື້ອ G. duodenalis cyst.ກຸ່ມທົດລອງ: ໜູໄດ້ຮັບ 100 µg ຂອງ pcDNA3.1(+)-giardine plasmid DNA (im), ຫຼັງຈາກນັ້ນ 3 ມື້ຕໍ່ມາ, 1.5 × 106 cysts/mouse ໄດ້ຖືກສັກຜ່ານ gavage.ນ້ໍາຫນັກຕົວຂອງຫນູແຕ່ລະຄົນໄດ້ຖືກຕິດຕາມຫຼັງຈາກການນໍາ G. duodenalis cyst ຜ່ານທໍ່.duodenum ສົດໄດ້ຖືກເກັບກໍາສໍາລັບການວັດແທກການໂຫຼດຂອງແມ່ກາຝາກແລະການວິເຄາະ HE staining.
ການປ່ຽນແປງທາງດ້ານ histopathological ໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍຂັ້ນຕອນທີ່ຈັດພີມມາກ່ອນຫນ້ານີ້ [30].duodenum ສົດຖືກສ້ອມແຊມດ້ວຍສານແກ້ໄຂຈຸລັງເນື້ອເຍື່ອ, ຝັງຢູ່ໃນ paraffin, ຕັດອອກເປັນ 4 μm, stained ດ້ວຍ H&E ແລະວິເຄາະພາຍໃຕ້ກ້ອງຈຸລະທັດແສງສະຫວ່າງ.ຜູ້ຕາງຫນ້າການປ່ຽນແປງທາງ pathological ໃນເຈັດສ່ວນເນື້ອເຍື່ອຈາກເຈັດຫນູເອກະລາດໄດ້ຖືກປະເມີນໂດຍ pathologist ບໍ່ຮູ້ການປິ່ນປົວແລະຖືກຈັບຢູ່ທີ່ 200x magnification.ຄວາມຍາວຂອງ villi ແລະຄວາມເລິກຂອງ crypts ໄດ້ຖືກວັດແທກໂດຍສອດຄ່ອງກັບວິທີການທີ່ໄດ້ອະທິບາຍກ່ອນຫນ້ານີ້.
ຜົນໄດ້ຮັບໃນ vitro ແລະ in vivo ໄດ້ຮັບໃນ triplicate.Graphs ຖືກສ້າງຂຶ້ນໂດຍໃຊ້ GraphPad Prism 7.00 (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, USA).ຄວາມແຕກຕ່າງລະຫວ່າງສອງກຸ່ມໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍ t-test, ໃນຂະນະທີ່ຄວາມແຕກຕ່າງລະຫວ່າງ ≥3 ກຸ່ມໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍການວິເຄາະທາງດຽວຂອງການປ່ຽນແປງ (ANOVA) ໂດຍໃຊ້ຊອບແວ SPSS (ຮຸ່ນ 22.0; SPSS IBM Corp., Armonk, NY, USA).ຂໍ້ມູນໄດ້ຖືກວິເຄາະສໍາລັບຄວາມເປັນເອກະພາບຂອງຄວາມແຕກຕ່າງໂດຍໃຊ້ການທົດສອບຂອງ Levene ຕິດຕາມດ້ວຍການທົດສອບ post hoc ຂອງ Bonferroni (B).ຄວາມສໍາຄັນແມ່ນສະແດງອອກເປັນ P<0.05, P<0.01, ແລະ P<0.001 (ບໍ່ສໍາຄັນ [ns]) (P>0.05).
ການວິເຄາະທີ່ຜ່ານມາຂອງພວກເຮົາກ່ຽວກັບ GEV proteomics ໃນ Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າຫຼາຍເປົ້າຫມາຍອາດຈະມີສ່ວນຮ່ວມໃນການກະຕຸ້ນຂອງເສັ້ນທາງສັນຍານອັກເສບ [13].ພວກເຮົາໄດ້ເລືອກສອງເປົ້າໝາຍທີ່ໂດດເດັ່ນ, alpha-2 ແລະ alpha-7.3 giardins, ຂະຫຍາຍໂມເລກຸນເຫຼົ່ານີ້ ແລະໃຊ້ພວກມັນເພື່ອສ້າງ pcDNA3.1(+) vector expression eukaryotic.ຫຼັງຈາກການຈັດຮຽງຕາມລໍາດັບ, recombinant pcDNA3.1(+)-alpha-2 ແລະ alpha-7.3 giardine expression plasmids ໄດ້ຖືກຖ່າຍທອດເຂົ້າໄປໃນ macrophages peritoneal ຂອງຫນູຕົ້ນຕໍ, ແລະ caspase-1 p20 signature protein ຂອງການອັກເສບ (ສ່ວນຫນຶ່ງຂອງການກະຕຸ້ນ caspase-1) ໄດ້ຖືກລະບຸ. ເປັນ elucidating ໂມເລກຸນທີ່ສໍາຄັນທີ່ສາມາດເຮັດໃຫ້ເກີດການອັກເສບ.ຜົນໄດ້ຮັບສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ alpha-2 ແລະ alpha-7.3 giardines ສາມາດກະຕຸ້ນການສະແດງອອກ p20 caspase-1 ທີ່ຄ້າຍຄືກັນກັບ GEV.ບໍ່ມີຜົນຕໍ່ການກະຕຸ້ນ caspase-1 ໃນການຄວບຄຸມທາງລົບທີ່ບໍ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວ (PBS ເທົ່ານັ້ນ) ແລະ plasmid control pcDNA3.1(+) (ຮູບ 1).
ການວັດແທກການກະຕຸ້ນ p20 caspase-1 ໂດຍ pcDNA3.1(+)-alpha-2 ແລະ alpha-7.3 giardins.Recombinant eukaryotic expression plasmids pcDNA3.1(+)-alpha-2 ແລະ alpha-7.3 giardines (ຂ້າງເທິງແຕ່ລະເສັ້ນ) ໄດ້ຖືກຖ່າຍທອດເຂົ້າໄປໃນ macrophages peritoneal ຂອງຫນູຕົ້ນຕໍແລະ supernatants ວັດທະນະທໍາໄດ້ຖືກຂຸດຄົ້ນ 24 ຊົ່ວໂມງຕໍ່ມາ.blotting ຕາເວັນຕົກໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອວັດແທກລະດັບການສະແດງອອກຂອງທາດໂປຼຕີນຈາກ caspase-1 p20 inflammasome.ກຸ່ມການປິ່ນປົວແບບ PBS ເທົ່ານັ້ນ (ເລນ C) ແລະກຸ່ມການປິ່ນປົວດ້ວຍ monotherapy pcDNA3.1 (+) (pcDNA3.1) ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນການຄວບຄຸມທາງລົບ, ແລະກຸ່ມການປິ່ນປົວ GEV ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນການຄວບຄຸມໃນທາງບວກ.ການສະແດງອອກຂອງທາດໂປຼຕີນຈາກປະສົມໄດ້ຖືກຢືນຢັນໂດຍການກວດສອບແທັກ histidine ໃນແຕ່ລະທາດໂປຼຕີນ, ແລະແຖບທາດໂປຼຕີນທີ່ຄາດວ່າຈະມີ alpha-2 giardine (38.2 kDa) ແລະ alpha-7.3 giardine (37.2 kDa).GEV, Giardia duodenum extracellular vesicles, pcDNA3.1(+), EcoRV-linearized vector, SUP, supernatant
ເພື່ອກໍານົດວ່າ alpha-2 giardine ແລະ alpha-7.3 giardine ເຮັດໃຫ້ເກີດການສະແດງອອກຂອງ p20 caspase-1 ແລະມີບົດບາດໃນການກະຕຸ້ນການຕອບສະຫນອງອັກເສບຂອງເຈົ້າພາບ NLRP3, pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine ແລະ pcDNA3.1(+)-alpha. -7.3 giardin ຖືກຖ່າຍທອດເຂົ້າໄປໃນ macrophages peritoneal ຫນູຕົ້ນຕໍທີ່ມີ DNA plasmid ປະສົມປະສານ, ແລະລະດັບການສະແດງອອກ, ທ້ອງຖິ່ນ, ແລະ oligomerization ຂອງໂປຣຕີນອັກເສບທີ່ສໍາຄັນ NLRP3 ໄດ້ຖືກກໍານົດ.ໃນການທົດລອງນີ້, GEV ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນກຸ່ມຄວບຄຸມໃນທາງບວກ, ແລະກຸ່ມທີ່ບໍ່ມີການປິ່ນປົວ (PBS ເທົ່ານັ້ນ) ຫຼືກຸ່ມການປິ່ນປົວການຖ່າຍທອດ pcDNA3.1(+) ແມ່ນກຸ່ມລົບ.ຜົນໄດ້ຮັບສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ, ເຊັ່ນດຽວກັບກຸ່ມ GEV, plasmid DNA ທີ່ປະສົມປະສານຂອງ giardin pcDNA3.1(+)-alpha-2 ແລະ giardin pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 ສົ່ງຜົນໃຫ້ມີການປັບຕົວຂອງ NLRP3, pro-IL-1β ແລະ. procaspase-1 ແລະ caspase-1 ການກະຕຸ້ນ (ຮູບ 2a).ນອກຈາກນັ້ນ, ທັງສອງ giardines induced ທີ່ສໍາຄັນ IL-1β secretion (pcDNA3.1: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.1000; alpha-2 giardine: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.007. ).;alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P<0.0001;GEV: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.0047) (ຮູບ 2b).ໂປຣຕີນ ASC ສ່ວນໃຫຍ່ເປັນໂມໂນເມຣິກຢູ່ໃນກຸ່ມທີ່ບໍ່ມີການປິ່ນປົວ ຫຼືຢູ່ໃນກຸ່ມການປິ່ນປົວທີ່ຖືກຖ່າຍທອດດ້ວຍ pcDNA3.1(+) plasmid, ກົງກັນຂ້າມກັບ pcDNA3.1(+)-alpha-2 ຫຼື pcDNA3.1(+)-alpha- 7.3 ເກຍດີນ.ASC oligomerization ເກີດຂຶ້ນໃນ plasmid DNA ທີ່ປະສົມປະສານຂອງກຸ່ມຄວບຄຸມທາງບວກຂອງ GEV ຫຼືກຸ່ມ, ສະແດງໃຫ້ເຫັນຮູບແບບ oligomeric (ຮູບ 2c).ຂໍ້ມູນເບື້ອງຕົ້ນເຫຼົ່ານີ້ແນະນໍາວ່າ alpha-2 giardine ແລະ alpha-7,3 giardine ສາມາດກະຕຸ້ນການກະຕຸ້ນການອັກເສບ NLRP3.ການສຶກສາ immunofluorescent ຕໍ່ມາຂອງທ້ອງຖິ່ນຂອງ ASC ແລະ NLRP3 ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າໃນກຸ່ມຄວບຄຸມທາງລົບ, ທາດໂປຼຕີນຈາກ ASC ໄດ້ຖືກກະແຈກກະຈາຍໄປທົ່ວ cytoplasm ແລະປະກົດວ່າເປັນສັນຍານຈຸດຕາມການກະຕຸ້ນຂອງ pcDNA3.1(+)-alpha-2 ກັບ giardine ຫຼື pcDNA3.1(+)-alpha-7,3 ກຸ່ມ giardine ຫຼືກຸ່ມຄວບຄຸມທາງບວກ GEV (ຮູບ 2d).ໃນກຸ່ມຄວບຄຸມທາງລົບ ແລະ plasmid-treated pcDNA 3.1, ສັນຍານໂປຣຕີນ NLRP3 ບໍ່ຖືກກວດພົບ, ໃນຂະນະທີ່ຈຸດສັນຍານ fluorescent ໃນການຕອບສະໜອງຕໍ່ pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine ຫຼື pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 ຖືກກວດພົບ..giardine ແມ່ນພົບເຫັນຢູ່ໃນ cytoplasm ຫຼືຕາມການກະຕຸ້ນຂອງ HEV (ຮູບ 2e).ຂໍ້ມູນເຫຼົ່ານີ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນຕື່ມອີກວ່າ G. duodenalis giardin alpha-2 ແລະ giardin alpha-7.3 ກະຕຸ້ນການອັກເສບ NLRP3 ໃນ macrophages peritoneal ຕົ້ນຕໍຂອງຫນູ.
pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardin ແລະ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardin ກະຕຸ້ນການອັກເສບ NLRP3 ໃນ macrophages peritoneal ຂອງຫນູ.ຖ່າຍທອດ plasmids ການສະແດງອອກ eukaryotic ທີ່ປະສົມພັນ pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardin ແລະ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardin ເຂົ້າໄປໃນ macrophages peritoneal murine ຕົ້ນຕໍແລະຈຸລັງ, ຫຼືເກັບກ່ຽວ supernatant ພາຍໃນ 24 ຊົ່ວໂມງສໍາລັບການວິເຄາະການສະແດງອອກ, oligomerization , ຄວາມລັບ.ແລະການທ້ອງຖິ່ນຂອງໂປຣຕີນອັກເສບທີ່ສໍາຄັນ.ກຸ່ມ PBS-only (C) ແລະກຸ່ມການປິ່ນປົວດຽວ pcDNA3.1(+) ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນການຄວບຄຸມທາງລົບ, ແລະກຸ່ມການປິ່ນປົວ GEV ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນກຸ່ມບວກ.ໂປຣຕີນອັກເສບທີ່ສໍາຄັນ NLRP3, ລວມທັງ NLRP3, pro-IL-1β, pro-caspase-1, ແລະ p20 caspase-1, ໄດ້ຖືກກວດພົບໂດຍການ blotting ຕາເວັນຕົກ.b ລະດັບຄວາມລັບຂອງ IL-1β ໃນ supernatants ໄດ້ຖືກກໍານົດໂດຍໃຊ້ enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).ຄວາມແຕກຕ່າງລະຫວ່າງກຸ່ມຄວບຄຸມແລະກຸ່ມທົດລອງໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍການວິເຄາະທາງດຽວຂອງການປ່ຽນແປງ (ANOVA) ໂດຍໃຊ້ຊອບແວ SPSS ຮຸ່ນ 22.0.ເຄື່ອງໝາຍດາວຊີ້ບອກຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສຳຄັນລະຫວ່າງກຸ່ມ **P<0.01 ແລະ ***P<0.001.c ລະດັບ ASC oligomerization ໃນເມັດໄດ້ຖືກກໍານົດໂດຍການວິເຄາະເຊື່ອມຕໍ່ຂ້າມ DSS, ໃນຂະນະທີ່ລະດັບ ASC ໃນ cell lysates ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນການຄວບຄຸມການໂຫຼດ.d ການເບິ່ງເຫັນພາບຂອງທ້ອງຖິ່ນ ISC ໂດຍໃຊ້ immunofluorescence.e Immunofluorescence ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອສະແດງພາບຂອງທ້ອງຖິ່ນຂອງ NLRP3.ASC, apoptotic speck ຄ້າຍຄືທາດໂປຼຕີນ;IL, interleukin;NLRP3, nucleotide-binding oligomerization-like receptor 3;ns, ບໍ່ສໍາຄັນ (P > 0.05)
ທັງ G. duodenalis ແລະ GEVs ທີ່ມັນ secretes ກະຕຸ້ນ NLRP3 inflammasome ແລະຄວບຄຸມການຕອບສະຫນອງອັກເສບຂອງເຈົ້າພາບໃນ vitro.ດັ່ງນັ້ນ, ບົດບາດຂອງ NLRP3 inflammasome ໃນການເຮັດໃຫ້ເກີດພະຍາດຂອງ G. duodenalis ຍັງບໍ່ຈະແຈ້ງ.ເພື່ອສືບສວນບັນຫານີ້, ພວກເຮົາໄດ້ອອກແບບການທົດລອງລະຫວ່າງຫນູທີ່ຕິດເຊື້ອ G. duodenalis cyst ແລະຫນູທີ່ຕິດເຊື້ອ G. duodenalis cyst + MCC950 inhibitor ແລະປຽບທຽບ NLRP3 inflammasome expression ເມື່ອຕິດເຊື້ອ G. duodenalis cyst.ໂຄງການລາຍລະອຽດຂອງການທົດລອງແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບ 3a.ການປ່ຽນແປງຂອງນ້ໍາຫນັກຕົວຂອງຫນູໃນກຸ່ມການປິ່ນປົວທີ່ແຕກຕ່າງກັນໄດ້ຖືກຕິດຕາມເປັນເວລາ 7 ມື້ຫຼັງຈາກການຕິດເຊື້ອ cysts, ແລະຜົນໄດ້ຮັບແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບ 3b.ເມື່ອປຽບທຽບກັບກຸ່ມທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ PBS ບໍລິສຸດ, ຜົນໄດ້ຮັບສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ (i) ນ້ໍາຫນັກຕົວຂອງຫນູທີ່ຕິດເຊື້ອ G. duodenalis cyst ຫຼຸດລົງຈາກມື້ 3 ຫາມື້ 7 ຫຼັງຈາກການຕິດເຊື້ອ;(ii) ການປິ່ນປົວດ້ວຍຢາຍັບຍັ້ງ MCC950 ບໍ່ມີຜົນກະທົບທີ່ສໍາຄັນຕໍ່ນ້ໍາຫນັກຕົວຂອງຫນູ..ເມື່ອປຽບທຽບກັບກຸ່ມການຕິດເຊື້ອດຽວ, BW ຂອງກຸ່ມການຕິດເຊື້ອ duodenal ທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ MCC950 ຫຼຸດລົງໃນລະດັບທີ່ແຕກຕ່າງກັນ (ມື້ 1: ANOVA, F(3, 24) = 1.885, P = 0.0148; ມື້ 2: ANOVA, F(3, 24) ) = 0.4602, P<0.0001; ມື້ທີ 3: ANOVA, F(3, 24) = 0.8360, P = 0.0010; ມື້ທີ 4: ANOVA, F(3, 24) = 1.683, P = 0.0052 ມື້ F 5: A (3, 24)=0.6497, P=0.0645; ມື້ທີ 6: ANOVA, F(3, 24)=5.457, P=0.0175; ມື້ທີ 7: ANOVA, F(3, 24) = 2.893, P = 0.0202).ຂໍ້ມູນເຫຼົ່ານີ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ NLRP3 inflammasome ປົກປ້ອງຫນູຈາກການສູນເສຍນ້ໍາຫນັກທີ່ສໍາຄັນໃນໄລຍະຕົ້ນ (2-4 ມື້) ຂອງການຕິດເຊື້ອ duodenal.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ພວກເຮົາມີຈຸດປະສົງເພື່ອກວດພົບ G. duodenalis trophozoites ໃນນ້ໍາ lavage duodenal ແລະຜົນໄດ້ຮັບແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບ 3c.ເມື່ອປຽບທຽບກັບກຸ່ມການຕິດເຊື້ອຂອງ G. duodenalis cyst, ຈໍານວນຂອງ trophozoites ໃນ duodenum ເພີ່ມຂຶ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍຫຼັງຈາກການສະກັດກັ້ນ NLRP3 inflammasome (t(12) = 2.902, P = 0.0133).ເນື້ອເຍື່ອ duodenal stained ກັບ HE ສະແດງໃຫ້ເຫັນ, ເມື່ອທຽບກັບການຄວບຄຸມທາງລົບທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ PBS ແລະ MCC950 ຢ່າງດຽວ: ​​(i) ການຕິດເຊື້ອ G. duodenalis cyst ເຮັດໃຫ້ເກີດຄວາມເສຍຫາຍຕໍ່ duodenal villi (ANOVA, F(3, 24) = 0.4903, P = 0.0488. ) ແລະ crypt atrophy (ANOVA, F(3, 24) = 0.4716, P = 0.0089);(ii) duodenum ຈາກຫນູທີ່ຕິດເຊື້ອ G. duodenalis cysts ແລະຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ MCC950 inhibitors.duodenal villi ໄດ້ຮັບຄວາມເສຍຫາຍແລະຕາຍ (ANOVA, F(3, 24) = 0.4903, P = 0.0144) ດ້ວຍການຫົດຕົວແລະການແຕກງ່າຂອງ crypt (ANOVA, F(3, 24) = 0.4716, P = 0, 0481) (ຮູບ 3d-. f).ຜົນໄດ້ຮັບເຫຼົ່ານີ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າ NLRP3 inflammasome ມີບົດບາດໃນການຫຼຸດຜ່ອນການຕິດເຊື້ອຂອງ G. duodenalis.
ບົດບາດຂອງ NLRP3 inflammasome ໃນການຕິດເຊື້ອ Giardia duodenum.ໜູໄດ້ຖືກນຳໄປກວດພະຍາດ (iv) ທີ່ມີຊ່ອງຄອດ duodenococcal ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນປິ່ນປົວດ້ວຍ ຫຼືບໍ່ມີ MCC950 (ip).ກຸ່ມການປິ່ນປົວດຽວທີ່ມີ PBS ຫຼື MCC950 ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນການຄວບຄຸມ.ກຸ່ມ​ທົດ​ລອງ​ແລະ​ລະ​ບຽບ​ການ​ການ​ປິ່ນ​ປົວ​.b ນ້ຳໜັກຕົວຂອງໜູໃນແຕ່ລະກຸ່ມການປິ່ນປົວຕ່າງໆແມ່ນໄດ້ຕິດຕາມເປັນເວລາ 7 ວັນ.ຄວາມແຕກຕ່າງລະຫວ່າງກຸ່ມການຕິດເຊື້ອ G. duodenalis ແລະກຸ່ມການປິ່ນປົວການຕິດເຊື້ອ G. duodenalis + MCC950 ໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍ t-test ໂດຍໃຊ້ຊອບແວ SPSS ຮຸ່ນ 22.0.ເຄື່ອງໝາຍດາວຊີ້ບອກຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສຳຄັນຢູ່ທີ່ *P<0.05, **P<0.01, ຫຼື ***P<0.001.c ການໂຫຼດ Parasitic ໄດ້ຖືກກໍານົດໂດຍການນັບຈໍານວນຂອງ trophozoites ໃນນ້ໍາ lavage duodenal.ຄວາມແຕກຕ່າງລະຫວ່າງກຸ່ມການຕິດເຊື້ອ G. duodenalis ແລະກຸ່ມການປິ່ນປົວການຕິດເຊື້ອ G. duodenalis + MCC950 ໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍ t-test ໂດຍໃຊ້ຊອບແວ SPSS ຮຸ່ນ 22.0.ເຄື່ອງໝາຍດາວຊີ້ໃຫ້ເຫັນຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສໍາຄັນຢູ່ທີ່ *P < 0.05.d Hematoxylin ແລະ eosin (H&E) staining ຜົນຂອງ histopathology duodenal.ລູກ​ສອນ​ສີ​ແດງ​ຊີ້​ບອກ​ຄວາມ​ເສຍ​ຫາຍ​ຂອງ villi​, ລູກ​ສອນ​ສີ​ຂຽວ​ຊີ້​ບອກ​ເຖິງ​ຄວາມ​ເສຍ​ຫາຍ​ຂອງ crypts ໄດ້​.ແຖບຂະຫນາດ: 100 µm.e, f ການວິເຄາະສະຖິຕິຄວາມສູງຂອງ duodenal villus ແລະຄວາມສູງຂອງ mouse crypt.ເຄື່ອງໝາຍດາວຊີ້ບອກຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສຳຄັນຢູ່ທີ່ *P<0.05 ແລະ **P<0.01.ຜົນໄດ້ຮັບແມ່ນໄດ້ມາຈາກ 7 ການທົດລອງທາງຊີວະພາບເອກະລາດ.BW, ນ້ໍາຫນັກຕົວ;ig, ເສັ້ນທາງການຈັດສົ່ງ intragastric;ip, ເສັ້ນທາງການຈັດສົ່ງ intraperitoneal;ns, ບໍ່ສໍາຄັນ (P> 0.05);PBS, phosphate buffered saline;WT, ປະເພດປ່າ
ຄວາມລັບຂອງ IL-1β ແມ່ນຈຸດເດັ່ນຂອງການກະຕຸ້ນການອັກເສບ.ເພື່ອກໍານົດວ່າ G. duodenalis alpha-2 giardine ແລະ alpha-7.3 giardine ເປີດໃຊ້ NLRP3 host inflammasome ໃນ vivo, ພວກເຮົາໄດ້ໃຊ້ຫນູ WT ທີ່ບໍ່ປິ່ນປົວ (ກຸ່ມ sham) ແລະຫນູທີ່ຖືກບລັອກ NLRP3 inflammasome (ກຸ່ມ MCC950 inhibited treatment).ລະບົບລາຍລະອຽດຂອງການທົດລອງສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 4a.ກຸ່ມທົດລອງປະກອບດ້ວຍຫນູທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ PBS, G. duodenalis cyst ການປິ່ນປົວໂດຍການ gavage, ການສັກຢາ intramuscular ຂອງ pcDNA3.1, ແລະການສັກຢາ intramuscular ຂອງ pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine ຫຼື pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine.ໃນມື້ທີ 7 ຫຼັງຈາກການບໍລິຫານ intramuscular ຂອງ plasmid recombinant, serum ໄດ້ຖືກເກັບກໍາແລະລະດັບຂອງ IL-1βໃນແຕ່ລະກຸ່ມໄດ້ຖືກກໍານົດ.ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຮູບ 4b, ໃນກຸ່ມ MOCK: (i) ເມື່ອປຽບທຽບກັບກຸ່ມ PBS, ການປິ່ນປົວ pcDNA3.1 ບໍ່ມີຜົນກະທົບທີ່ສໍາຄັນຕໍ່ IL-1β secretion (ANOVA, F(4.29)=4.062, P=0.9998), ແນວໃດກໍ່ຕາມ, ຄວາມລັບຂອງ IL-β ແມ່ນເພີ່ມຂຶ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນກຸ່ມ G. duodenalis cyst (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P = 0.0002), (ii) pcDNA3.1-alpha-2 giardine ແລະ pcDNA3.1- ການສັກຢາ intramuscular ຂອງ alpha-7.3 giardine ເພີ່ມຂຶ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນລະດັບ serum IL-1β (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P<0.0001);(iii) pcDNA3.1-alpha-7,3 giardine induced high level of IL -1β secretion in the pcDNA3.1-alpha-2 giardine intramuscular group (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P = 0.0333) .ເມື່ອປຽບທຽບກັບແຕ່ລະກຸ່ມໃນກຸ່ມການປິ່ນປົວ MCC950 ແລະກຸ່ມ MOCK: (i) ລະດັບຄວາມລັບຂອງ IL-1β ໃນກຸ່ມຄວບຄຸມ PBS ແລະກຸ່ມຄວບຄຸມ pcDNA3.1 ຫຼຸດລົງໃນລະດັບໃດຫນຶ່ງຫຼັງຈາກສະກັດຕົວຍັບຍັ້ງ MCC950, ແຕ່ຄວາມແຕກຕ່າງບໍ່ແມ່ນ. ທີ່ສໍາຄັນ (PBS: ANOVA, F (9, 58) = 3.540, P = 0.4912 pcDNA3.1: ANOVA, F(9, 58) = 3.540, P = 0.5949);(ii) ຫຼັງຈາກປິດກັ້ນ MCC950., ຄວາມລັບຂອງ IL-1β ໄດ້ຖືກຫຼຸດລົງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນກຸ່ມ G. duodenalis cyst-infected, ກຸ່ມ pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ແລະກຸ່ມ pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine (G. duodenalis: ANOVA, F(9). , 58) = 3.540 , P = 0.0120; ) = 3.540, P = 0.0164).ຜົນໄດ້ຮັບເຫຼົ່ານີ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າ alpha-2 giardine ແລະ alpha-7.3 giardine ໄກ່ເກ່ຍການກະຕຸ້ນຂອງ NLRP3 inflammasome ໃນ vivo.
pcDNA3.1(+)-giardines ເປີດໃຊ້ NLRP3 host inflammasome ໃນ vivo.ໜູໄດ້ຮັບພູມຕ້ານທານ (IM) ດ້ວຍການສະແດງອອກຂອງ eukaryotic plasmid pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine ຫຼື pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ MCC950 (ip; ກຸ່ມ MCC950) ຫຼືບໍ່ (ກຸ່ມ dummy ).ກຸ່ມການປິ່ນປົວ PBS ຫຼື pcDNA3.1(+) plasmid ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນການຄວບຄຸມທາງລົບ, ກຸ່ມການປິ່ນປົວ G. duodenalis cyst ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນການຄວບຄຸມໃນທາງບວກ.ກຸ່ມ​ທົດ​ລອງ​ແລະ​ລະ​ບຽບ​ການ​ການ​ປິ່ນ​ປົວ​.b ລະດັບ serum ຂອງ IL-1β ໃນຫນູໄດ້ຖືກວັດແທກໃນວັນທີ 7 ໂດຍ ELISA assay.ຄວາມແຕກຕ່າງລະຫວ່າງກຸ່ມໃນກຸ່ມ MOCK ໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍໃຊ້ ANOVA ທາງດຽວ, ແລະຄວາມແຕກຕ່າງລະຫວ່າງກຸ່ມ MOCK ແລະກຸ່ມ MCC950 ໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍໃຊ້ t-test ຂອງຊອບແວ SPSS ເວີຊັນ 22.0.ຮູບດາວຊີ້ໃຫ້ເຫັນຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສໍາຄັນລະຫວ່າງກຸ່ມການປິ່ນປົວໃນກຸ່ມ MOCK, *P<0.05 ແລະ ***P<0.001;ເຄື່ອງຫມາຍເງິນໂດລາ ($) ຊີ້ໃຫ້ເຫັນຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສໍາຄັນລະຫວ່າງແຕ່ລະກຸ່ມໃນກຸ່ມ MOCK ແລະກຸ່ມ MCC950 ທີ່ P<0.05.ຜົນໄດ້ຮັບຂອງເຈັດການທົດລອງຊີວະພາບເອກະລາດ.i, ການສັກຢາເຂົ້າກ້າມ, ns, ບໍ່ສໍາຄັນ (P> 0.05)
ເພື່ອສືບສວນຜົນກະທົບຂອງການກະຕຸ້ນ alpha-2 ແລະ alpha-7.3 giardine-mediated ຂອງ NLRP3 host inflammasome ຕໍ່ການຕິດເຊື້ອ G. duodenalis, ພວກເຮົາໄດ້ໃຊ້ຫນູ WT C57BL/6 ແລະສັກຢາ alpha-2 giardine ແລະ alpha-7.3 giardine.plasmid ໄດ້ຖືກສີດ intramuscularly, ຫຼັງຈາກ 3 ມື້ຜ່ານທໍ່ gastric ຂອງ G. duodenalis cyst, ຫຼັງຈາກນັ້ນຫນູໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນເປັນເວລາ 7 ມື້.ລະບົບລາຍລະອຽດຂອງການທົດລອງແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບ 5a.ນ້ໍາຫນັກຕົວຂອງຫນູແຕ່ລະຄົນໄດ້ຖືກວັດແທກທຸກໆມື້, ຕົວຢ່າງຂອງເນື້ອເຍື່ອ duodenal ສົດໄດ້ຖືກເກັບກໍາໃນວັນທີ 7 ຫຼັງຈາກການບໍລິຫານຜ່ານທໍ່ກະເພາະອາຫານ, ຈໍານວນຂອງ trophozoites ໄດ້ຖືກວັດແທກ, ແລະການປ່ຽນແປງທາງຊີວະວິທະຍາໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນ.ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 5b, ເມື່ອເວລາໃຫ້ອາຫານເພີ່ມຂຶ້ນ, BW ຂອງຫນູໃນແຕ່ລະກຸ່ມເພີ່ມຂຶ້ນເທື່ອລະກ້າວ.MT ຂອງຫນູເລີ່ມຫຼຸດລົງໃນວັນທີ 3 ຫຼັງຈາກການບໍລິຫານ intragastric ຂອງ G. duodenalis cysts, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນເພີ່ມຂຶ້ນເທື່ອລະກ້າວ.ການກະຕຸ້ນຂອງ NLRP3 inflammasome induced ໂດຍການສັກຢາ intramuscular ຂອງ alpha-2 giardine ແລະ alpha7.3 giardine ຫຼຸດລົງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນຫນູຫຼຸດລົງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ (ມື້ 1: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 1.39, P. = 0 .9754 ມື້ທີ 1: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30)=1.399, P=0.9987 ມື້ທີ 2: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.3172, P = 0.9979; ມື້ທີ 2: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.3172, P = 0.8409; ມື້ທີ 3: pcDNA3.1-alpha-2 NOVA, F(4, 30) 4, 30) = 0.8222, P = 0.0262 ມື້ທີ 3: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4 , 30) = 0.8222, P = 0.0083 ມື້ທີ 4: pcDNA3.1-alpha-A2; , F(4, 30) = 0.5620, P = 0.0012, ມື້ທີ 4: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5620, P < 0.0001, ມື້ທີ 5: pcDNA3.1-alpha -alpha 2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.9728, P < 0.0001 ມື້ທີ 5: pcDNA3.1-alpha -7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.9728, P < 0.0001 ມື້ 6: 1pcDNA alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.7154, P = 0.0012, ມື້ທີ 6: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.7154, P = 0.0006;ວັນທີ 7: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5369, P<0.0001 ວັນທີ 7: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5369, P <0.0001).ການໂຫຼດຂອງແມ່ກາຝາກໄດ້ຖືກປະເມີນຢູ່ໃນ duodenum (ຮູບ 5c).ເມື່ອປຽບທຽບກັບການຄວບຄຸມໃນທາງບວກທີ່ບໍ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວແລະກຸ່ມທີ່ສັກຢາດ້ວຍ vector pcDNA3.1 ຫວ່າງເປົ່າ, ຈໍານວນຂອງ G. duodenalis trophozoites ໄດ້ຫຼຸດລົງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນກຸ່ມທີ່ສັກຢາ α-2 giardine ແລະ α-7,3 giardine (pcDNA3.1-alpha. -2 giardine : ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P = 0.0002, pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P<0.0001).ນອກຈາກນັ້ນ, giardine alfa-7.3 ແມ່ນປ້ອງກັນໃນຫນູຫຼາຍກ່ວາ giardine alfa-2 (ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P = 0.0081).ຜົນໄດ້ຮັບຂອງ HE staining ແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບ.5d–f.ໜູທີ່ສັກຢາ alpha-2 giardine ແລະ alpha-7.3 giardine ມີບາດແຜຂອງເນື້ອເຍື່ອ duodenal ໜ້ອຍລົງ, ສະແດງອອກໂດຍຄວາມເສຍຫາຍຂອງ villus, ເມື່ອປຽບທຽບກັບໜູທີ່ສັກຢາ G. duodenalis ແລະໜູທີ່ສັກຢາ G. duodenalis ປະສົມປະສານກັບ pcDNA3 vector ເປົ່າຫວ່າງ .1 Zoom.(pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.466, P = 0.0035 ຫຼື P = 0.0068; pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.466, P = 0.0028 ຫຼື P = 0.0055) ແລະຫຼຸດລົງ crypt atrophy (pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 1.470, P = 0.0264 ຫຼື P = 0.0158; pcDNA3.1-alpha-7: A.3. , F(3, 24) = 1.470, P = 0.0371 ຫຼື P = 0.0191).ຜົນໄດ້ຮັບເຫຼົ່ານີ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າ alpha-2 giardine ແລະ alpha-7,3 giardine ຫຼຸດຜ່ອນການຕິດເຊື້ອຂອງ G. duodenalis ໂດຍການກະຕຸ້ນ NLRP3 inflammasome ໃນ vivo.
ບົດບາດຂອງ pcDNA3.1(+)-giardins ໃນການຕິດເຊື້ອ G. duodenalis.ໜູໄດ້ຮັບພູມຕ້ານທານ (IM) ດ້ວຍ plasmids ການສະແດງອອກ eukaryotic recombinant pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine ຫຼື pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນທ້າທາຍກັບ G. duodenalis cysts (ig).ກຸ່ມ PBS ແລະກຸ່ມການປິ່ນປົວ pcDNA3.1(+) + duodenal cyst ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນກຸ່ມຄວບຄຸມທາງລົບ, ແລະກຸ່ມການປິ່ນປົວ cyst duodenal ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນກຸ່ມຄວບຄຸມໃນທາງບວກ.ກຸ່ມ​ທົດ​ລອງ​ແລະ​ລະ​ບຽບ​ການ​ການ​ປິ່ນ​ປົວ​.b MT ຂອງຫນູໃນແຕ່ລະກຸ່ມການປິ່ນປົວຕ່າງໆໄດ້ຖືກຕິດຕາມ 7 ມື້ຫຼັງຈາກສິ່ງທ້າທາຍ.ຮູບດາວຊີ້ໃຫ້ເຫັນຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສໍາຄັນລະຫວ່າງກຸ່ມໃນກຸ່ມ G. duodenalis ແລະກຸ່ມ pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine, *P < 0.05, **P < 0.01, ແລະ *** P < 0.001;ສັນຍາລັກເງິນໂດລາ ($) ຊີ້ໃຫ້ເຫັນຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສໍາຄັນລະຫວ່າງແຕ່ລະກຸ່ມຂອງ G. duodenalis ແລະກຸ່ມ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 jardine, $$P<0.01 ແລະ $$$P<0.001.c ການໂຫຼດຂອງແມ່ກາຝາກໄດ້ຖືກກໍານົດໂດຍການນັບຈໍານວນຂອງ trophozoites ໃນ 1 ml ຂອງ lavage duodenal ຈາກ duodenum (ຍາວ 3 ຊມ) ແລະສະແດງອອກເປັນຈໍານວນຂອງແມ່ກາຝາກຕໍ່ຊມຂອງ duodenum.ຄວາມແຕກຕ່າງລະຫວ່າງກຸ່ມການຕິດເຊື້ອ G. duodenalis, ກຸ່ມ pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine, ແລະກຸ່ມ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine ແມ່ນໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍ ANOVA ທາງດຽວໂດຍໃຊ້ຊອບແວ SPSS ເວີຊັນ 22.0.ເຄື່ອງໝາຍດາວຊີ້ບອກຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສຳຄັນຢູ່ທີ່ **P<0.01 ແລະ ***P<0.001.d ການປ່ຽນແປງທາງດ້ານ histopathological ໃນ duodenum.ລູກ​ສອນ​ສີ​ແດງ​ຊີ້​ບອກ​ຄວາມ​ເສຍ​ຫາຍ​ຂອງ villi​, ລູກ​ສອນ​ສີ​ຂຽວ​ຊີ້​ບອກ​ເຖິງ​ຄວາມ​ເສຍ​ຫາຍ​ຂອງ crypts ໄດ້​.ແຖບຂະຫນາດ: 100 µm.e, f ການວິເຄາະສະຖິຕິຂອງ mouse duodenal villus height (e) ແລະ crypt height (f).ຄວາມແຕກຕ່າງລະຫວ່າງກຸ່ມໃນຮູບ 1d ໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍ ANOVA ທາງດຽວໂດຍໃຊ້ຊອບແວ SPSS ເວີຊັນ 22.0.ເຄື່ອງໝາຍດາວຊີ້ບອກຄວາມແຕກຕ່າງທີ່ສຳຄັນຢູ່ທີ່ *P<0.05 ແລະ **P<0.01.ຜົນໄດ້ຮັບຂອງເຈັດການທົດລອງຊີວະພາບເອກະລາດ.ns, ບໍ່ສໍາຄັນ (P > 0.05)
Giardia duodenum ເປັນແມ່ກາຝາກລໍາໄສ້ທີ່ມີຊື່ສຽງຂອງມະນຸດແລະສັດລ້ຽງລູກດ້ວຍນົມອື່ນໆທີ່ເຮັດໃຫ້ເກີດ giardiasis.ໃນປີ 2004, ມັນຖືກລວມເຂົ້າໃນການລິເລີ່ມພະຍາດທີ່ຖືກລະເລີຍຂອງອົງການອະນາໄມໂລກເນື່ອງຈາກການແຜ່ລະບາດສູງໃນໄລຍະ 6 ປີ, ໂດຍສະເພາະໃນຊຸມຊົນທີ່ມີສະຖານະພາບເສດຖະກິດສັງຄົມຕໍ່າ [32].ລະບົບພູມຕ້ານທານພາຍໃນມີບົດບາດສໍາຄັນໃນການຕອບສະຫນອງພູມຕ້ານທານຕໍ່ການຕິດເຊື້ອ G. duodenalis.macrophages ຫນູໄດ້ຖືກລາຍງານວ່າ engulf ແລະຂ້າ G. duodenalis ໂດຍການປ່ອຍໃສ່ກັບດັກ extracellular [33].ການສຶກສາທີ່ຜ່ານມາຂອງພວກເຮົາໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ G. duodenalis, ເປັນແມ່ກາຝາກ extracellular ທີ່ບໍ່ບຸກລຸກ, ກະຕຸ້ນ p38 MAPK, ERK, NF-κB p65, ແລະເສັ້ນທາງສັນຍານອັກເສບ NLRP3 ໃນ macrophages ຫນູເພື່ອຄວບຄຸມການຕອບສະຫນອງອັກເສບຂອງເຈົ້າພາບ, ແລະ GEV ​​ປ່ອຍອອກມາອາດຈະປັບປຸງຂະບວນການນີ້.13], 24].ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, PAMPs ທີ່ແນ່ນອນທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການອັກເສບ NLRP3 inflammasome-regulated ໃນ GEV ແລະບົດບາດຂອງ NLRP3 inflammasome ໃນ giardiasis ຍັງຄົງໄດ້ຮັບການອະທິບາຍ.ເພື່ອ​ໃຫ້​ຄວາມ​ສະຫວ່າງ​ຕໍ່​ສອງ​ຄຳຖາມ​ນີ້, ພວກ​ເຮົາ​ໄດ້​ດຳ​ເນີນ​ການ​ສຶກສາ​ນີ້.
NLRP3 inflammasome ຕັ້ງຢູ່ໃນ cytoplasm ຂອງຈຸລັງພູມຕ້ານທານແລະສາມາດໄດ້ຮັບການກະຕຸ້ນໂດຍອະນຸພາກຕ່າງໆເຊັ່ນໄປເຊຍກັນອາຊິດ uric, toxins, ເຊື້ອແບັກທີເຣັຍ, ໄວຣັສ, ແລະແມ່ກາຝາກ.ໃນການສຶກສາກ່ຽວກັບເຊື້ອແບັກທີເຣັຍ, ສານພິດໄດ້ຖືກລະບຸວ່າເປັນ PAMPs ທີ່ສໍາຄັນທີ່ກະຕຸ້ນເຊັນເຊີອັກເສບ, ນໍາໄປສູ່ການອັກເສບແລະການຕາຍຂອງເຊນ [34].ບາງສານພິດທີ່ມີໂຄງສ້າງ, ເຊັ່ນ: hemolysin ຈາກ Staphylococcus aureus [35] ແລະ Escherichia coli [36], hemolysin BL (HBL) ຈາກ enterotoxin (NHE) [37], ກະຕຸ້ນການກະຕຸ້ນຂອງການອັກເສບ NLRP3.ການສຶກສາໄວຣັດໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າທາດໂປຼຕີນຈາກໄວຣັດເຊັ່ນ SARS-COV-2 envelope (E) protein [38] ແລະ Zika virus NS5 protein [39] ແມ່ນ PAMPs ທີ່ສໍາຄັນທີ່ໄດ້ຮັບການຍອມຮັບໂດຍ NLRP3 receptor.ໃນການສຶກສາຂອງແມ່ກາຝາກ, ແມ່ກາຝາກຈໍານວນຫຼາຍໄດ້ຖືກລາຍງານວ່າກ່ຽວຂ້ອງກັບການກະຕຸ້ນການອັກເສບຂອງເຈົ້າພາບ, ເຊັ່ນ: Toxoplasma gondii, Trichomonas vaginalis [40], Trypanosoma cruzi [41], ແລະ Leishmania [42].ທາດໂປຼຕີນຈາກ granule ຫນາແຫນ້ນ GRA35, GRA42, ແລະ GRA43, ທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ virulence ຂອງ Toxoplasma gondii, ແມ່ນຕ້ອງການສໍາລັບການ induction ຂອງ pyroptosis ໃນ macrophages ຫນູ Lewis [43].ນອກຈາກນັ້ນ, ບາງການສຶກສາ Leishmania ໄດ້ສຸມໃສ່ໂມເລກຸນສ່ວນບຸກຄົນທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບການອັກເສບ NLRP3, ເຊັ່ນ: ເຍື່ອຫຸ້ມກາຝາກ lipophosphoglycan [44] ຫຼື zinc metalloprotease [45].ໃນບັນດາກຸ່ມພັນທຸກໍາທີ່ຄ້າຍຄືກັບ alpha-giardin ຂອງ annexin, alpha-1 giardin ໄດ້ຖືກສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າເປັນຢາວັກຊີນທີ່ມີທ່າແຮງທີ່ສະຫນອງການປົກປ້ອງ G. duodenalis ໃນຮູບແບບຫນູ [18].ໃນການສຶກສາຂອງພວກເຮົາ, ພວກເຮົາໄດ້ເລືອກ G. duodenalis virulence factors alpha-2 ແລະ alpha-7,3 giardines, ເຊິ່ງເປັນເອກະລັກຂອງ giardia ແຕ່ລາຍງານຂ້ອນຂ້າງຫນ້ອຍ.genes ເປົ້າໝາຍສອງອັນນີ້ໄດ້ຖືກໂຄນເຂົ້າໄປໃນ pcDNA3.1(+) vector system ການສະແດງອອກ eukaryotic ສໍາລັບການວິເຄາະການກະຕຸ້ນການອັກເສບ.
ໃນຮູບແບບຫນູຂອງພວກເຮົາ, ຊິ້ນ caspase cleaved ເປັນເຄື່ອງຫມາຍຂອງການກະຕຸ້ນການອັກເສບ.ຕາມການກະຕຸ້ນ, NLRP3 ພົວພັນກັບ ASC, ທົດແທນ procaspases, ແລະສ້າງ caspases ທີ່ມີການເຄື່ອນໄຫວທີ່ແຍກ pro-IL-1β ແລະ pro-IL-18 ເຂົ້າໄປໃນ IL-1β ແລະ IL-18 ແກ່, ຕາມລໍາດັບ -18.caspases ອັກເສບ (caspases-1, -4, -5 ແລະ -11) ແມ່ນຄອບຄົວອະນຸລັກຂອງ cysteine ​​​​proteases ທີ່ມີຄວາມສໍາຄັນສໍາລັບການປ້ອງກັນຈາກພາຍໃນແລະມີສ່ວນຮ່ວມໃນການອັກເສບແລະການເສຍຊີວິດຂອງຈຸລັງທີ່ມີໂຄງການ [46].Caspase-1 ຖືກກະຕຸ້ນໂດຍ canonical inflammasomes [47], ໃນຂະນະທີ່ caspases-4, -5, ແລະ -11 ຖືກຕັດໃນລະຫວ່າງການສ້າງຕັ້ງຂອງ inflammasomes atypical [48].ໃນການສຶກສານີ້, ພວກເຮົາໄດ້ນໍາໃຊ້ macrophages peritoneal ຫນູເປັນຕົວແບບແລະໄດ້ສືບສວນ p20 caspase-1 cleaved caspase-1 ເປັນເຄື່ອງຫມາຍການກະຕຸ້ນການອັກເສບຂອງ host NLRP3 ໃນການສຶກສາການຕິດເຊື້ອ G. duodenalis.ຜົນໄດ້ຮັບສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ alpha-giardins ຈໍານວນຫຼາຍມີຄວາມຮັບຜິດຊອບຕໍ່ການກະຕຸ້ນປົກກະຕິຂອງການອັກເສບ, ເຊິ່ງສອດຄ່ອງກັບການຄົ້ນພົບໂມເລກຸນທີ່ສໍາຄັນທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບເຊື້ອແບັກທີເຣັຍແລະໄວຣັສ.ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ການສຶກສາຂອງພວກເຮົາແມ່ນພຽງແຕ່ຫນ້າຈໍເບື້ອງຕົ້ນເທົ່ານັ້ນແລະມີໂມເລກຸນອື່ນໆທີ່ສາມາດກະຕຸ້ນ inflammasomes ທີ່ບໍ່ແມ່ນຄລາສສິກ, ຍ້ອນວ່າການສຶກສາທີ່ຜ່ານມາຂອງພວກເຮົາພົບເຫັນທັງ inflammasomes ຄລາສສິກແລະບໍ່ຄລາສສິກໃນການຕິດເຊື້ອ G. duodenalis [13].ເພື່ອກໍານົດຕື່ມອີກວ່າ p20 caspase-1 ທີ່ສ້າງຂຶ້ນແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງກັບ NLRP3 inflammasome, ພວກເຮົາໄດ້ຖ່າຍທອດ alpha-2 ແລະ alpha-7.3 giardins ເຂົ້າໄປໃນ macrophages peritoneal ຫນູເພື່ອກໍານົດລະດັບການສະແດງອອກຂອງທາດໂປຼຕີນຈາກໂມເລກຸນທີ່ສໍາຄັນແລະລະດັບ ASC oligomerization, ຢືນຢັນວ່າທັງສອງ α-giardins ກະຕຸ້ນ. ອັກເສບ NLRP3.ຜົນໄດ້ຮັບຂອງພວກເຮົາແມ່ນແຕກຕ່າງກັນເລັກນ້ອຍຈາກ Manko-Prykhoda et al., ຜູ້ທີ່ລາຍງານວ່າການກະຕຸ້ນຂອງເຊນ Caco-2 ທີ່ມີສາຍພັນ G. muris ຫຼື E. coli EPEC ຢ່າງດຽວສາມາດເພີ່ມຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ fluorescence ຂອງ NLRP3, ASC, ແລະ caspase-1, ເຖິງແມ່ນວ່າບໍ່ສໍາຄັນ, ໃນຂະນະທີ່ການກະຕຸ້ນຂອງ G. muris ແລະ E. coli ເພີ່ມລະດັບຂອງສາມທາດໂປຼຕີນ [49].ຄວາມແຕກຕ່າງນີ້ອາດຈະເປັນຍ້ອນຄວາມແຕກຕ່າງໃນການຄັດເລືອກຊະນິດຂອງ Giardia, ສາຍເຊນ, ແລະຈຸລັງຕົ້ນຕໍ.ພວກເຮົາຍັງໄດ້ເຮັດການວິເຄາະ vivo ໂດຍໃຊ້ MCC950 ໃນຫນູ WT C57BL/6 ເພດຍິງອາຍຸ 5 ອາທິດ, ເຊິ່ງມີຄວາມອ່ອນໄຫວຕໍ່ກັບ G. duodenalis.MCC950 ເປັນຕົວຍັບຍັ້ງ NLRP3 ໂມເລກຸນຂະຫນາດນ້ອຍທີ່ມີສັກຍະພາບ ແລະເລືອກທີ່ສະກັດການກະຕຸ້ນ NLRP3 ທີ່ເປັນ canonical ແລະບໍ່ແມ່ນ canonical ຢູ່ທີ່ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ nanomolar.MCC950 ຍັບຍັ້ງການເປີດໃຊ້ງານ NLRP3 ແຕ່ບໍ່ມີຜົນກະທົບຕໍ່ການກະຕຸ້ນຂອງເສັ້ນທາງອັກເສບ AIM2, NLRC4, ແລະ NLRP1 ຫຼືເສັ້ນທາງສັນຍານ TLR [27].MCC950 ຂັດຂວາງການເປີດໃຊ້ NLRP3 ແຕ່ບໍ່ໄດ້ຂັດຂວາງການເລີ່ມຕົ້ນ NLRP3, K+ efflux, Ca2+ influx, ຫຼືການໂຕ້ຕອບລະຫວ່າງ NLRP3 ແລະ ASC;ແທນທີ່ຈະ, ມັນຍັບຍັ້ງການກະຕຸ້ນ NLRP3 inflammasome ໂດຍການຂັດຂວາງ ASC oligomerization [27].ດັ່ງນັ້ນ, ພວກເຮົາໄດ້ໃຊ້ MCC950 ໃນການສຶກສາໃນ vivo ເພື່ອກໍານົດບົດບາດຂອງ NLRP3 inflammasome ຫຼັງຈາກການສັກຢາ giardine.caspase-1 p10 ທີ່ຖືກເປີດໃຊ້ແລ້ວເຮັດໃຫ້ cytokines ອັກເສບ pro-IL-1β ແລະ pro-IL-18 ກາຍເປັນ IL-1β ແລະ IL-18 ທີ່ແກ່ແລ້ວ [50].ໃນການສຶກສານີ້, ລະດັບ serum IL-1βໃນຫນູທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ giardine ທີ່ມີຫຼືບໍ່ມີ MCC950 ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນຕົວຊີ້ບອກວ່າການອັກເສບ NLRP3 ໄດ້ຖືກກະຕຸ້ນ.ຕາມທີ່ຄາດໄວ້, ການປິ່ນປົວ MCC950 ຫຼຸດລົງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນລະດັບ serum IL-1β.ຂໍ້ມູນເຫຼົ່ານີ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນຢ່າງຊັດເຈນວ່າ G. duodenalis giardin alfa-2 ແລະ giardin alfa-7.3 ສາມາດເປີດໃຊ້ NLRP3 mouse inflammasome.
ຂໍ້ມູນທີ່ສໍາຄັນທີ່ສະສົມໃນທົດສະວັດທີ່ຜ່ານມາໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ IL-17A ແມ່ນຜູ້ຄວບຄຸມແມ່ບົດຂອງພູມຕ້ານທານກັບ G. muris, ກະຕຸ້ນໃຫ້ສັນຍານ IL-17RA, ການຜະລິດ peptides ຕ້ານເຊື້ອຈຸລິນຊີ, ແລະຄວບຄຸມການກະຕຸ້ນເສີມ [51].ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ການຕິດເຊື້ອ Giardia ເກີດຂື້ນເລື້ອຍໆໃນໄວຫນຸ່ມ, ແລະມັນໄດ້ຖືກລາຍງານວ່າການຕິດເຊື້ອ Giardia ໃນຫນູຫນຸ່ມບໍ່ໄດ້ກະຕຸ້ນການຕອບສະຫນອງ IL-17A ເພື່ອໃຊ້ຜົນກະທົບປ້ອງກັນຂອງມັນ [52], ກະຕຸ້ນໃຫ້ນັກຄົ້ນຄວ້າຊອກຫາ Giardia immunomodulatory ອື່ນໆ.ກົນໄກຂອງການຕິດເຊື້ອ helminth.ຜູ້ຂຽນຂອງການສຶກສາທີ່ຜ່ານມາໄດ້ລາຍງານວ່າ G. muris ສາມາດກະຕຸ້ນ NLRP3 inflammasome ໂດຍ E. coli EPEC, ເຊິ່ງສົ່ງເສີມການຜະລິດ peptides antimicrobial ແລະຫຼຸດຜ່ອນຄວາມສາມາດໃນການຍຶດຕິດຂອງມັນແລະຈໍານວນຂອງ trophozoites ໃນລໍາໄສ້, ດັ່ງນັ້ນການຫຼຸດຜ່ອນຄວາມຮຸນແຮງຂອງລໍາໄສ້. ພະຍາດທີ່ເກີດຈາກ bacilli [49].NLRP3 inflammasome ແມ່ນມີສ່ວນຮ່ວມໃນການພັດທະນາຂອງພະຍາດຕ່າງໆ.ການສຶກສາໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ Pseudomonas aeruginosa ກະຕຸ້ນ autophagy ໃນ macrophages ເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການເສຍຊີວິດຂອງເຊນ, ແລະຂະບວນການນີ້ແມ່ນຂຶ້ນກັບການກະຕຸ້ນຂອງ NLRP3 inflammasome [53].ສໍາລັບ N. caninum, reactive oxygen species-mediated activation of the NLRP3 inflammasome limits its replication in host , ເຮັດໃຫ້ມັນເປັນເປົ້າຫມາຍການປິ່ນປົວທີ່ມີທ່າແຮງ [9].Paracoccidioides brasiliensis ໄດ້ຖືກພົບເຫັນວ່າກະຕຸ້ນການກະຕຸ້ນຂອງ NLRP3 inflammasome ໃນຈຸລັງ dendritic ທີ່ມາຈາກກະດູກຫນູ, ສົ່ງຜົນໃຫ້ການປ່ອຍ cytokine ອັກເສບ IL-1β, ເຊິ່ງມີບົດບາດສໍາຄັນໃນການປ້ອງກັນເຈົ້າພາບ [10].Leishmania ຫຼາຍຊະນິດ, ລວມທັງ L. amazonensis, L. major, L. braziliensis, ແລະ L. infantum chagasi, ກະຕຸ້ນ NLRP3 ແລະ ASC-dependent caspase-1 ໃນ macrophages, ເຊັ່ນດຽວກັນກັບການຕິດເຊື້ອ Leishmania.ການຈໍາລອງຂອງແມ່ກາຝາກໄດ້ຖືກປັບປຸງໃຫ້ດີຂຶ້ນໃນຫນູທີ່ຂາດແຄນໃນ NLRP3/ASC/caspase-1 gene [11].Zamboni et al.ການຕິດເຊື້ອ Leishmania ໄດ້ຖືກລາຍງານວ່າເຮັດໃຫ້ເກີດການກະຕຸ້ນຂອງ NLRP3 inflammasome ໃນ macrophages, ເຊິ່ງຈໍາກັດການຈໍາລອງຂອງແມ່ກາຝາກພາຍໃນຈຸລັງ.ດັ່ງນັ້ນ, Leishmania ອາດຈະຂັດຂວາງການເປີດໃຊ້ NLRP3 ເປັນຍຸດທະສາດການຫຼີກລ່ຽງ.ໃນການສຶກສາ vivo, NLRP3 inflammasome ປະກອບສ່ວນເຂົ້າໃນການກໍາຈັດ Leishmania, ແຕ່ບໍ່ມີຜົນກະທົບຕໍ່ເນື້ອເຍື່ອ [54].ໃນທາງກົງກັນຂ້າມ, ໃນການສຶກສາ helminthiasis, ການກະຕຸ້ນຂອງ NLRP3 inflammasome ສະກັດກັ້ນພູມຕ້ານທານຂອງເຈົ້າພາບກັບ helminthiasis gastrointestinal [12].Shigella ແມ່ນຫນຶ່ງໃນເຊື້ອແບັກທີເຣັຍຕົ້ນຕໍທີ່ເຮັດໃຫ້ເກີດພະຍາດຖອກທ້ອງໃນທົ່ວໂລກ.ເຊື້ອແບັກທີເຣັຍເຫຼົ່ານີ້ສາມາດກະຕຸ້ນການຜະລິດ IL-1β ໂດຍຜ່ານ P2X7 receptor-mediated K+ efflux, ຊະນິດອົກຊີເຈນທີ່ມີປະຕິກິລິຍາ, ການເປັນກົດຂອງ lysosomal, ແລະຄວາມເສຍຫາຍຂອງ mitochondrial.NLRP3 inflammasome ຄວບຄຸມ phagocytosis ໃນທາງລົບແລະການເຄື່ອນໄຫວຂອງແບັກທີເລຍຂອງ macrophages ຕໍ່ກັບ Shigella [55].ການສຶກສາຂອງ Plasmodium ໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າຫນູທີ່ຂາດແຄນ AIM2, NLRP3 ຫຼື caspase-1 ທີ່ຕິດເຊື້ອ Plasmodium ຜະລິດລະດັບສູງຂອງ interferon ປະເພດ 1 ແລະທົນທານຕໍ່ການຕິດເຊື້ອ Plasmodium ຫຼາຍ [56].ຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ບົດບາດຂອງ alpha-2 giardine ແລະ alpha-7.3 giardine ໃນການກະຕຸ້ນການກະຕຸ້ນຂອງເຊື້ອພະຍາດຂອງການອັກເສບ NLRP3 ໃນຫນູແມ່ນບໍ່ຈະແຈ້ງ.
ໃນການສຶກສານີ້, ການຍັບຍັ້ງ NLRP3 inflammasome ໂດຍ MCC950 ຫຼຸດລົງ BW ແລະເພີ່ມຈໍານວນຂອງ trophozoites ໃນນ້ໍາ lavage ລໍາໄສ້ໃນຫນູ, ສົ່ງຜົນໃຫ້ການປ່ຽນແປງທາງ pathological ຮ້າຍແຮງກວ່າເກົ່າໃນເນື້ອເຍື່ອ duodenal.Alpha-2 giardine ແລະ alpha-7.3 giardine ກະຕຸ້ນຫນູເຈົ້າພາບ NLRP3 inflammasome, ເພີ່ມນ້ໍາຫນັກຕົວຂອງຫນູ, ຫຼຸດຜ່ອນຈໍານວນຂອງ trophozoites ໃນນ້ໍາ lavage ລໍາໄສ້, ແລະຫຼຸດຜ່ອນການບາດແຜຂອງ duodenal pathological.ຜົນໄດ້ຮັບເຫຼົ່ານີ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າ G. duodenalis ສາມາດກະຕຸ້ນ NLRP3 host inflammasome ຜ່ານ alpha-2 giardine ແລະ alpha-7,3 giardine, ຫຼຸດຜ່ອນການເຮັດໃຫ້ເກີດພະຍາດຂອງ G. duodenalis ໃນຫນູ.
ໂດຍລວມແລ້ວ, ຜົນໄດ້ຮັບຂອງພວກເຮົາສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ alpha-2 ແລະ alpha-7.3 giardines ກະຕຸ້ນການກະຕຸ້ນຂອງ NLRP3 host inflammasome ແລະຫຼຸດຜ່ອນການຕິດເຊື້ອຂອງ G. duodenalis ໃນຫນູ.ດັ່ງນັ້ນ, ໂມເລກຸນເຫຼົ່ານີ້ແມ່ນເປົ້າຫມາຍທີ່ດີສໍາລັບການປ້ອງກັນ giardiasis.
       Data supporting the results of this study can be obtained from the respective author at gongpt@jlu.edu.cn.
Liang AKS, Liang AAM, Huang AHC, Sergi KM, Kam JKM.Giardiasis: ພາບລວມ.ມັນໄດ້ຖືກເປີດເຜີຍເມື່ອບໍ່ດົນມານີ້ວ່າ Pat Inflamm ມີອາການແພ້ຢາ.2019; 13:134–43.
Escobedo AA, Tsimerman S. Giardiasis: ການທົບທວນຄືນຂອງຢາປົວພະຍາດ.ຄວາມຄິດເຫັນຂອງຜູ້ຊ່ຽວຊານດ້ານການຢາ.2007;8:1885–902.
Tian Huafeng, Chen Bin, Wen Jianfeng.Giardiasis, ການຕໍ່ຕ້ານຢາເສບຕິດແລະການຄົ້ນພົບເປົ້າຫມາຍໃຫມ່.ຕິດ​ເຊື້ອ​ເປົ້າ​ຫມາຍ​ຢາ​ເສບ​ຕິດ Disord​.2010; 10:295–302.
Wang Z, Zhang X, Xiao Yi, Zhang W, Wu X, Qin T, ແລະອື່ນໆ NLRP3 inflammasome ແລະພະຍາດອັກເສບ.Oxide Med Cell Longev.2020;2020:4063562.
Chen GY, Núñez G. ບົດບາດຂອງ inflammasome ໃນການອັກເສບຂອງລໍາໄສ້ແລະມະເຮັງ.ກະເພາະອາຫານ.ປີ 2011;141:1986–99.
Pellegrini C, Antonioli L, Lopez-Castejon G, Blandizzi C, Fornai M. Canonical ແລະ atypical NLRP3 inflammasome activation ຢູ່ທາງແຍກຂອງຄວາມທົນທານຂອງພູມຕ້ານທານແລະການອັກເສບຂອງລໍາໄສ້.ພູມຕ້ານທານກ່ອນ.2017; 8:36.
Li L, Wang XC, Gong PT, Zhang N, Zhang X, Li S, et al.ROS-mediated NLRP3 inflammasome activation ມີສ່ວນຮ່ວມໃນການຕອບສະໜອງຕໍ່ການຕິດເຊື້ອ N. caninum.ແມ່ກາຝາກ vector.2020; 13:449.